GUS染色試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Gus (β-glucuronidase，β-D- 葡萄糖苷酸酶)基因是目前常用的一種報(bào)告基因，其表達(dá)產(chǎn)物 β-葡萄糖苷酸酶 (GUS)是一種水解酶，能催化許多 β-葡萄糖苷酯類物質(zhì)的水解，它可以將 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（x-gluc）分解為藍(lán)色的物質(zhì)，其檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏、穩(wěn)定，且背景活性低。因?yàn)榻^大多數(shù)植物細(xì)胞內(nèi)不存在內(nèi)源的 GUS 活性，因此gus基因廣泛用作轉(zhuǎn)基因植物的報(bào)告基因，尤其是在研究外源基因瞬時(shí)表達(dá)的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中廣泛應(yīng)用。

該試劑盒包含 GUS 染色的全部試劑，使用方便，只需將配制好的 X-gluc 溶液和緩沖液按照比例混合即配成 GUS 染色液。該試劑盒可以配制 50ml GUS 染色液。         

使用說明：

1、X-gluc 溶液(50×)配制：

吸取 1ml X-gluc 溶解液加入到 X-gluc 管中，徹底混勻，至粉末完全溶解，即配成 X-gluc 溶液(50×)，該溶液-20℃避光保存。該溶液穩(wěn)定性較差，-20℃避光保存 20-30 天左右不變色，長(zhǎng)期保存建議按照需要分裝到棕色管里，-80℃避光保存。

注：剛配制的 X-gluc 溶液顏色為無色，貯存一段時(shí)間后，溶液可能變?yōu)榧t色或棕色，這表明 X-gluc 底物部分失活，但仍可繼續(xù)使用，不會(huì)嚴(yán)重影響 GUS 底物的顯色反應(yīng)。

2、GUS 染色工作液配制：

注：GUS 染色工作液最好現(xiàn)用現(xiàn)配，短期貯存可以-20℃保存 2-3 天。

3、GUS 染色步驟：

（1）取材：將葉片、花瓣、根莖等組織剪成小片，放于 1.5ml 離心管中。注：用于染色的植物材料的制備方法要因涉及的特定組織和器官的不同而異。例如，擬南芥的根、花和葉片以及煙草幼苗的根就可以不作任何預(yù)處理而直接染色。但是像煙草和馬鈴薯這些植物的莖和葉就必須在染色前切成薄片（1-3mm）。當(dāng)操作大的組織和樣品時(shí)，可以選用真空滲入法來幫助底物滲入細(xì)胞。

（2）染色：加入適量配制好的 GUS 染色工作液完全覆蓋材料；錫箔紙包好常溫放置3 小時(shí)-過夜。注意要做陰性和陽性對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

（3）洗脫：將材料轉(zhuǎn)入 70％酒精中脫色 2-3 次，至陰性對(duì)照材料為白色。GUS 染色陽性的藍(lán)色斑點(diǎn)很穩(wěn)定，在酒精中不褪色。（4）觀察：一般染色后，GUS 染色陽性的藍(lán)色斑點(diǎn)肉眼就能看到。但是有些材料可能藍(lán)色斑點(diǎn)很細(xì)微，要在顯微鏡下才能看到。

案例圖展示：

保存條件：

配制好的 X-gluc 溶液-20℃避光保存 20-30 天，長(zhǎng)期-80℃保存；GUS 染色緩沖液 4℃

保存：GUS 染色工作液最好現(xiàn)用現(xiàn)配，短期貯存可以-20℃保存 2-3 天。

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