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Phalloidin-iFluor? 594 Conjugate鬼筆環(huán)肽-iFluor? 594
| 貨號 | LX8801 | 售價（元） | 2006.4 |
| 規(guī)格 | 300T | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
產(chǎn)品信息
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
價格/元 |
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LX8801 |
Phalloidin-iFluor? 594 Conjugate鬼筆環(huán)肽-iFluor? 594 |
300T |
2006.4 |
產(chǎn)品簡介
鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）的結(jié)合阻止絲狀肌動蛋白（微絲）的解離，穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu)，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態(tài)平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度（CC）降至＜1μg/mL，因此，可用作一種聚合促進劑。此外，鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品為鬼筆環(huán)肽-iFluor 594標(biāo)記探針會選擇性地結(jié)合F-肌動蛋白。以納摩爾濃度使用，鬼筆環(huán)肽衍生物是方便的探針，用于標(biāo)記，鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片中的F-肌動蛋白，細胞培養(yǎng)物或無細胞實驗。肌動蛋白是一種球狀的，大約42kDa的蛋白質(zhì)，幾乎存在于所有真核細胞中。 它也是最高度保守的蛋白質(zhì)之一，與藻類和人類不同的物種相差不超過20％。 肌動蛋白是細胞中兩種細絲的單體亞基：微絲，細胞骨架的三個主要組分之一，以及微絲，是肌細胞中收縮裝置的一部分。 因此，肌動蛋白參與許多重要的細胞過程，包括肌肉收縮，細胞運動，細胞分裂和胞質(zhì)分裂，囊泡和細胞器運動，細胞信號傳導(dǎo)，以及細胞連接和細胞形狀的建立和維持。
本品以1000×儲存液形式（溶于DMSO）提供，按照100μl/孔（96孔板），總共可做300T。
注意事項：
鬼筆環(huán)肽 的分子量小，很容易通過細胞，不需要對細胞進行冷丙酮和TRITON X-100處理。毒性較大，戴上手套操作。
有幾種方法都能用來染色組織細胞培養(yǎng)物內(nèi)的肌動蛋白絲（F-actin）染色，其中，固定步驟在獲得可信且具代表性的細胞F-actin分布情況中至關(guān)重要。固定步驟基于實驗自身需求來選擇。多聚甲醛或戊二醛都能得到優(yōu)秀的F-actin染色和良好的板狀偽足維持保存。
一、實驗材料準(zhǔn)備
1.1 iFluor 594 Phalloidin（貨號 LX8801）
1.2 1×PBS Buffer（pH 7.4）, for Cell Culture（貨號 SH30256.01）
1.3 固定液（溶于PBS的4%多聚甲醛，pH 7.0）
1.4 破膜液（溶于PBS的0.5% Triton X-100）
1.5 （可選）抗熒光淬滅劑
1.6 （可選）即用型PI染色液（貨號 4209）
1.7 （可選）BSA, Standard Grade（貨號 J8660）
1.8 黑框/透明底的96孔細胞培養(yǎng)板
二、染色工作液準(zhǔn)備
2.1 于實驗前將低溫保存的iFluor 594Phalloidin置于室溫回溫至少20min，低速離心后才開瓶。第一次使用請將本品按照單次用量進行分裝，置于-20℃避光保存，一年穩(wěn)定。
2.2 本品以1000×DMSO儲存液形式提供。開始實驗前，使用1×PBS Buffer（pH 7.4）將其稀釋到1×染色工作液（比如1μl儲存液加入1ml PBS Buffer），用槍吹勻即可。
【注①】：以96孔板為檢測體系，按照100μl/孔來計算，準(zhǔn)備足量的染色工作液；也可對細胞爬片進行染色，但需調(diào)整染色工作液的用量，以能覆蓋住細胞為準(zhǔn)。
【注②】：最佳的工作濃度和孵育時間取決于特定的應(yīng)用。根據(jù)特定的細胞類型和/或細胞/組織對探針的通透性來調(diào)整合適的染色條件。
【注③】：可使用含1% BSA的PBS Buffer稀釋儲存液，能夠降低非特異背景染色，也能最小化鬼筆環(huán)肽粘附到管壁的可能性。
【注④】：染色工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，室溫避光保存。
三、染色流程（以96孔板為例）
3.1 用黑框/透明底的96孔板進行細胞培養(yǎng)，使其貼壁生長達到70-80%的匯合度。
3.2 吸掉培養(yǎng)液，用37℃預(yù)熱的1×PBS Buffer（pH 7.4）清洗細胞2次。
3.3 用溶于PBS的4%多聚甲醛固定細胞，室溫固定10-30min?！咀⒁狻浚汗潭ㄟ^程中甲醇能破壞肌動蛋白，因此，固定液中最好避免接觸任何甲醇。最好的固定液是無甲醇的甲醛。
3.4 用1×PBS Buffer清洗細胞2-3次，室溫下30s/次。
3.5 用破膜緩沖液透化細胞，室溫處理5min。
3.6 用1×PBS Buffer清洗細胞2-3次，室溫下30s/次。
3.7 取100μl現(xiàn)配的iFluor 594Phalloidin染色工作液到每個孔內(nèi)，室溫避光孵育30-90min。
【注意】：若有需要，此時可加入即用型PI染色液或其他不同于iFluor 594熒光光譜的細胞核染色液。
3.8 用1×PBS Buffer清洗細胞2-3次，室溫下30s/次。
3.9 加抗熒光淬滅劑（如Fluoromount-GTM）到孔內(nèi)保護熒光。
3.10 熒光顯微鏡下觀察染色結(jié)果，選擇iFluor 594激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=590/618nm）。若做細胞核染色，選擇合適濾片，比如PI激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=364/454nm）。
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