產(chǎn)品信息

親脂性熒光染料PKH67(Green)和PKH26(Red) 適用于常規(guī)細(xì)胞膜標(biāo)記。熒光染料PKH67 是?種可對(duì)體外和體內(nèi)細(xì)胞示蹤的綠色熒光染料，通過(guò)與膜結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)分?結(jié)合?標(biāo)記細(xì)胞。PKH67對(duì)細(xì)胞毒性較?，熒光背景低，脂溶性?，能夠輕易穿透細(xì)胞膜，有著強(qiáng)?穩(wěn)定的綠?熒光。經(jīng)PKH67標(biāo)記的細(xì)胞可?于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染?的功能。在細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中，PKH67 的熒光強(qiáng)度會(huì)隨著細(xì)胞的分裂?逐級(jí)遞減，標(biāo)記熒光可平均分配?兩個(gè)?代細(xì)胞中，因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的?半，根據(jù)這?特性，它可被?于檢測(cè)細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期的估算及細(xì)胞分裂等??。PKH67標(biāo)記細(xì)胞的熒光?常均?，并且分裂后的?代細(xì)胞的熒光分配也更均?。在細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中，PKH67標(biāo)記熒光可平均分配?兩個(gè)?代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的?半，通過(guò)流式細(xì)胞儀根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同，可檢測(cè)出未分裂細(xì)胞，分裂?次(1/2 的熒光強(qiáng)度)，?次(1/4 的熒光強(qiáng)度)，三次(1/8的熒光強(qiáng)度)，以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。PKH67 可檢測(cè)分裂次數(shù)多達(dá)六次甚?更多。除了?于細(xì)胞增殖檢測(cè)，PKH67 還可以?于細(xì)胞的體外盒體內(nèi)?蹤，標(biāo)記后熒光在胞內(nèi)表達(dá)穩(wěn)定，陽(yáng)性標(biāo)記率達(dá)98%以上，標(biāo)記細(xì)胞形態(tài)良好，能有效地觀察細(xì)胞在體外的誘導(dǎo)分化情況；或?qū)?biāo)記的細(xì)胞注?體內(nèi)，可以有效的顯?移植細(xì)胞在活體組織中的遷移及分化。PKH67標(biāo)記的細(xì)胞?于體內(nèi)觀察可以長(zhǎng)達(dá)數(shù)周之久，它常被?來(lái)做活體細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)和?熒光電鏡觀察細(xì)胞長(zhǎng)期活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)。PKH67 毒性較?，不影響細(xì)胞的增殖能?。此?法操作簡(jiǎn)單，且不?放射性同位素，不存在安全隱患?？梢愿焖?，更準(zhǔn)確和更安全地得到想要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

由于炭尾長(zhǎng)度更長(zhǎng)，內(nèi)部研究已經(jīng)證明PKH67比PKH2由更少的細(xì)胞間轉(zhuǎn)移。在采用PKH1和PKH2進(jìn)行的體內(nèi)研究中，熒光強(qiáng)度都會(huì)緩慢損失。由于這是綠色細(xì)胞linker染料而非紅色細(xì)胞linker染料出現(xiàn)的行為特征，因而PKH67會(huì)出現(xiàn)類似的性質(zhì)。不分裂細(xì)胞的體外細(xì)胞膜留存和體內(nèi)熒光半衰期的關(guān)聯(lián)性揭示，PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。其他具有類似半衰期的綠色細(xì)胞linker染料已經(jīng)被用于監(jiān)測(cè)1-2月內(nèi)的體內(nèi) 淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞運(yùn)輸，結(jié)果表明PKH67還可用于中等時(shí)長(zhǎng)的體內(nèi)跟蹤研究。

染料可以穩(wěn)定的與細(xì)胞膜脂質(zhì)區(qū)結(jié)合并發(fā)出熒光，主要用于細(xì)胞體外標(biāo)記、體外細(xì)胞增殖研究以及體內(nèi)外的細(xì)胞示蹤研究。PKH67的體內(nèi)熒光半衰期為10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更長(zhǎng)的半衰期，標(biāo)記在兔紅細(xì)胞上的PKH26半衰期長(zhǎng)達(dá)100天以上。特別適用于體外增殖研究以及長(zhǎng)期的體內(nèi)細(xì)胞跟蹤研究。PKH67標(biāo)記細(xì)胞后通常?流式細(xì)胞儀進(jìn)?細(xì)胞增殖檢測(cè)。

試劑盒組分

PKH67標(biāo)記細(xì)胞呈綠?熒光，熒光波長(zhǎng)：λex=490 nm,  λem=502 nm。

實(shí)驗(yàn)步驟

1．染色液制備：

（1）從冰箱中取出PKH67試劑，靜置?分鐘?室溫，或者37℃?浴?刻后，離?盛放PKH67 的管?，開蓋前請(qǐng)務(wù)必離??分鐘讓試劑充分落?管底后才能開蓋。

（2）根據(jù)需要檢測(cè)的細(xì)胞樣品數(shù)，?稀釋液將探針10倍稀釋，再?合適的溶液(如：??清培養(yǎng)基，HBSS或PBS)將PKH67母液25倍稀釋，配制成染??作液。最佳?作液濃度請(qǐng)根據(jù)不同細(xì)胞和??的實(shí)驗(yàn)體系來(lái)調(diào)整。?般細(xì)胞使?按試劑盒中的母液的終濃度250倍稀釋即可，有些細(xì)胞可能需要適當(dāng)增加濃度。

2. 細(xì)胞染色

（1）將制備好的待測(cè)細(xì)胞?100μl染??作液重懸，?細(xì)胞濃度?約107/ml。也可以進(jìn)?原位染?，染?液?夠覆蓋細(xì)胞即可。

（2）在2～8 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 15～30分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。

建議待標(biāo)記細(xì)胞在染??作液中于37℃孵育5min，再于4℃孵育15min。

低溫孵育可降低細(xì)胞對(duì)染料的內(nèi)吞作?，有助于染料對(duì)質(zhì)膜的標(biāo)記，并且降低染料定位細(xì)胞質(zhì)囊泡的可能性。

（3）離?后去上清，收集細(xì)胞，?PBS或??清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞1-2次，最后加?PBS或??清培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

（4）取500μl 細(xì)胞懸液，?流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Ex/Em=490/502nm。

（5）隨后還可按照細(xì)胞的正常培養(yǎng)?法進(jìn)?培養(yǎng)。

（6）可以在熒光顯微鏡下直接觀察標(biāo)記效果，也可以在培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后再?流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖，或?于其他特定實(shí)驗(yàn)?的的細(xì)胞熒光?蹤。

儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存有效期1年

注意事項(xiàng)：

1.染?濃度根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少?異。

2.配制的PKH67母液極易?解，建議分裝保存， ≦-20℃冷凍干燥保存。

3.PKH67 ?作液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)?，不能提前配制，因?yàn)镻KH67 吸?會(huì)分解，影響染?效果。

4.PKH67 易被?解，在?溶液中會(huì)很快變質(zhì)。母液請(qǐng)?jiān)谑?過(guò)程中避免接觸?。?作液在標(biāo)記細(xì)胞的過(guò)程5.中和?接觸是在許可的時(shí)間范圍內(nèi)的。

6.PKH67熒光染?劑為乙醇溶液，在4℃、冰浴等較低溫度情況下會(huì)凝固?粘在離?管管底、管壁或管蓋內(nèi)，7.從冰箱取出后恢復(fù)?室溫，變成液體狀態(tài)后離??管底部再開蓋?？梢?7℃?浴?刻?全部融解后使?。

8.不同的細(xì)胞種類標(biāo)記后可以?蹤的代次或時(shí)間差異較?，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況或參考?獻(xiàn)進(jìn)?檢測(cè)。

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