產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

鬼筆環(huán)肽是一種從鬼筆鵝膏中得到的有毒的環(huán)狀七肽，可以與纖維肌動蛋白絲非常特異的結(jié)合，并且具有很高的親和力。它能使肌動蛋白聚合物的臨界濃度降低到小于1μg/mL，因此，常作為一種聚合促進(jìn)劑使用。該物質(zhì)可以被綠色熒光染料標(biāo)記，從而作為標(biāo)記物用于組織細(xì)胞培養(yǎng)、組織切片或無細(xì)胞系中的肌動蛋白標(biāo)記。被Acti-stainTM 488 phalloidin標(biāo)記的肌動蛋白絲其生物學(xué)特性未發(fā)生改變，包括與肌球蛋白結(jié)合的能力。

iFluorTM 488呈橙色，固體，分子量1406。該化合物吸光度和熒光掃描顯示分別在500nm和550nm有一吸收峰和熒光峰。

注意事項：              

鬼筆環(huán)肽  的分子量小，很容易通過細(xì)胞，不需要對細(xì)胞進(jìn)行冷丙酮和TRITON X-100處理。毒性較大，戴上手套操作。

鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）的結(jié)合阻止絲狀肌動蛋白（微絲）的解離，穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu)，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態(tài)平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度（CC）降至＜1μg/mL，因此，可用作一種聚合促進(jìn)劑。此外，鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。

本品為iFluorTM 488標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽，可發(fā)出高亮度、光穩(wěn)定的綠色熒光，染色反應(yīng)特異性強，對比性高，具有比Actin抗體更好的染色效果，適合用作F-actin的定性和定量檢測。iFluorTM 488 鬼筆環(huán)肽染色與用于細(xì)胞分析的其他熒光染色完全兼容，包括熒光蛋白、Qdot? 納米晶體和其他iFluorTM偶聯(lián)物（包含iFluorTM偶聯(lián)二抗）。另外，經(jīng)本品結(jié)合后的F-actin仍能維持actin自身具有的許多生物學(xué)特性。且本品的結(jié)合沒有物種差異性，適用性廣泛。

本品以1000×儲存液形式（溶于DMSO）提供。

操作步驟

1. 1×工作液準(zhǔn)備

吸取1μl 1000×iFluorTM 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽（溶于DMSO）到1ml 含有1%BSA的PBS緩沖液中即可得到1×工作液。

注：1）使用前需將1000×DMSO iFluorTM 488鬼筆環(huán)肽儲存液分裝并于-20℃避光干燥保存。

2）不同的細(xì)胞染色情況不同，相應(yīng)iFluorTM 488鬼筆環(huán)肽使用量也需根據(jù)不同情況而定。

2. 染色步驟

1）   細(xì)胞培養(yǎng)過夜或更長，使其密度達(dá)到50-60%匯合度。

2）   吸掉培養(yǎng)液，37℃預(yù)熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細(xì)胞2次。

3）   使用溶于PBS的4%甲醛溶液進(jìn)行細(xì)胞固定，室溫固定10-30min。

注意：避免固定劑中含有甲醇成分，因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。

4）   室溫條件下，用PBS清洗細(xì)胞2~3次，每次10min。

5）   （可選）：室溫條件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化處理3-5min，從而增加其通透性。

6）   室溫條件下，用PBS清洗細(xì)胞2~3次，每次10min。

7）   取足夠量新鮮配好的 iFluorTM 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液以覆蓋住細(xì)胞，如：100μl/孔（96孔板），室溫避光染色20-90min。

8）   用PBS清洗細(xì)胞3次，每次5min。

9）   （可選）：加入足量的即用型DAPI溶液對細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染，如：100μl/孔（96孔板），室溫3~5min。用PBS清洗細(xì)胞2次，每次5min。

10）于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察，選擇iFluorTM 488激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=493/517nm）和/或DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片（Ex/Em=364/454nm）。

1）DMSO有毒，使用時請小心操作。

2）了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

Note:   鬼筆環(huán)肽具有毒性，需小心操作（對人，其半數(shù)致死劑量為2mg/Kg）。