產品簡介

       本試劑盒在磁珠捕獲法的基礎上進行改良優(yōu)化，添加了CD9/CD81/CD63 三種磁珠可特異性捕獲EVs表面的標志性蛋白。以CD9磁珠為例，EVlent中的功能化磁珠可以高效地將EVs捕獲到裝配了EVs特征蛋白CD9抗體的修飾珠上，這些磁珠對EVs表面的CD9蛋白具有獨特親和性；可滿足多種下游實驗需求，如外泌體-細胞共培養(yǎng)實驗、蛋白組學研究、NGS高通量測序和WB檢測等。

產品組分及儲存條件

操作流程

1. 血漿樣本離心(2000 g、5-10min)取上清備用，-80 ℃長期保存，避免反復凍融。

2. 取200 μL血漿，加入800 μL預冷Incubation buffer Ⅰ，室溫混勻。

3. 加入40 μL EVlent magnetic beads，室溫搖勻孵育2-3 h。

4. 用磁力架磁吸3 min，分離棄去上清，再加入1 mL Incubation buffer Ⅱ，上下顛倒搖勻20次，磁吸分離棄去上清。

5. 加入1 mL Washing Buffer，上下顛倒搖勻20次，磁吸3 min分離棄去上清。重復該步驟2次。

以下步驟需根據下游實驗需求，選擇相應的操作方法：

若下游為蛋白組學研究（優(yōu)先推薦）

a. 將步驟5得到的beads，加入50 μL Lysis buffer ；

b. 按照實驗室常規(guī)的組學前處理步驟處理即可，或者選用組學前處理試劑盒（YW006）進行處理快速且高效。

若下游為WB表征研究

a. 將步驟5得到的beads，加入4×LDS 上樣緩沖液（B0007, Invitrogen）；

b. 95℃煮5 min后，磁性分離后，吸取上清進行PAGE膠上樣。

若下游為NTA和TEM檢測

a. 加入100 μL Elution Buffer，渦旋震蕩10 min后，磁吸3 min收集上清。

b. 再次加入100 μL Elution Buffer，渦旋震蕩10 min后，磁吸3 min收集合并上清。

備注：若下游為NTA/TEM檢測則需酌情增加血漿樣本量，建議500 μL效果更佳。

注意事項和免責聲明

       1.磁珠靜置后會沉淀，每次使用磁珠前請溫和、充分的震蕩，使磁珠保持均勻的懸浮狀態(tài)。

       2.Elution Buffer有刺激性氣味，請盡量在通風櫥內使用。

       3.磁珠保存及使用過程中應避免冷凍、干燥和高速離心等操作，否則會破壞磁珠結構，影響蛋白結合能力。

       4.本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究使用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。