產(chǎn)品簡介

脂質(zhì)氧化(MDA)檢測試劑盒(Lipid Peroxidation MDA Assay Kit)采用一種基于MDA和硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)反應(yīng)產(chǎn)生紅色產(chǎn)物的顯色反應(yīng)，隨后通過比色法用于對血漿、血清、尿液、動植物組織或細(xì)胞裂解液中MDA進(jìn)行定量檢測，廣泛用于脂質(zhì)氧化(lipid peroxidation)水平檢測的試劑盒。
   丙二醛(Malondialdehyde,MDA)是一種生物體脂質(zhì)氧化的天然產(chǎn)物。動物或植物細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激(oxidative stress)時，會發(fā)生脂質(zhì)氧化。一些脂肪酸氧化后逐漸分解為一系列復(fù)雜的化合物，其中包括MDA。此時通過檢測MDA的水平即可檢測脂質(zhì)氧化的水平，因此MDA的測定被廣泛用作脂質(zhì)氧化的指標(biāo)。生物體內(nèi)的一些其它生化反應(yīng)也會產(chǎn)生MDA，例如thromboxane synthase也可以催化產(chǎn)生，但只要在測定時設(shè)置適當(dāng)對照即可觀察到脂質(zhì)氧化水平的變化。
丙二醛在較高溫度及酸性環(huán)境中可與TBA發(fā)生反應(yīng)，形成紅色的MDA-TBA加合物，相應(yīng)的反應(yīng)原理圖如下：

MDATBAMDA-TBA Adduct

MDA-TBA加合物在535nm處有最大吸收，據(jù)此可以通過比色法進(jìn)行檢測。另外，MDA-TBA加合物也可以在535nm被激發(fā)產(chǎn)生最大發(fā)射波長553nm，據(jù)此也可以進(jìn)行熒光檢測。
特點(diǎn)：本試劑盒中采用了特殊的抗氧化劑，可以有效地抑制樣品在檢測過程中產(chǎn)生新的MDA，使檢測更加準(zhǔn)確。同時本檢測試劑盒在檢測過程中可以把部分MDA天然形成的聚丙二醛分解成MDA，使對脂質(zhì)氧化的測定更加準(zhǔn)確。
   本試劑盒可以檢測低達(dá)1μM的MDA，也可檢測高達(dá)200μM的MDA (參考圖1)。血漿、血清樣品中的MDA含量通常在約2-4μM，尿液中的MDA含量通常在約5-30μM，在本試劑盒的檢測范圍內(nèi)，可以直接用本試劑盒檢測血漿、血清、尿液樣品等。

圖1. 不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品使用本試劑盒的檢測效果圖。實(shí)測數(shù)據(jù)會因檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據(jù)僅供參考。

試劑盒組份： 

注意事項(xiàng)：

1)醛、較高濃度的可溶性糖(例如250mM蔗糖)對反應(yīng)有干擾，可溶性糖與TBA顯色反應(yīng)的產(chǎn)物在532nm也有吸收(最大吸收在450nm)。如果可溶性糖對測定有干擾，可以通過測定450nm作為參考波長進(jìn)行雙波長測定，消除其干擾。

2)本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

3)為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法：

1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 血漿、血清或尿液樣品制備后可以直接用于MDA測定。
b. 組織或細(xì)胞可以使用PBS或裂解液進(jìn)行勻漿或裂解。對于組織，組織重量占勻漿液或裂解液的比例為10%；對于細(xì)胞，每100萬細(xì)胞使用0.1ml裂解液或勻漿液。勻漿或裂解后，10,000g-12,000g離心10分鐘取上清用于后續(xù)測定。對于一些特殊樣品，離心不能獲得澄清的上清溶液的，可以使用0.2微米孔徑的過濾器過濾以獲得澄清的樣品溶液。勻漿或裂解等樣品制備步驟宜在冰浴或4℃進(jìn)行操作。
c. 對于組織或細(xì)胞樣品，樣品準(zhǔn)備完畢后用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，便于后續(xù)計(jì)算單位蛋白重量組織或細(xì)胞內(nèi)的MDA含量。
d. 本試劑盒對于樣品中的常見化學(xué)成分的兼容性參考下表：

2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. TBA儲存液的配制：稱取適量TBA，用TBA配制液配制成濃度為0.37%的TBA儲存液。例如18.5mg TBA用5ml TBA配制液配制，或者25mg TBA用6.76ml TBA配制液配制，最終濃度即為0.37%。TBA配制液需完全溶解后再使用，可以加熱到70℃以促進(jìn)溶解。TBA儲存液較難溶解，需加熱到70℃，并通過劇烈Vortex以促進(jìn)溶解。配制好的TBA儲存液室溫避光保存，至少3個月內(nèi)有效。
b. MDA檢測工作液的配制: 根據(jù)待測定的樣品數(shù)(含對照)，參考下表在臨檢測前新鮮配制適量的MDA檢測工作液

注意: MDA檢測工作液較難溶解，可以70℃加熱，并劇烈Vortex以促進(jìn)溶解。也可以通過超聲處理以促進(jìn)溶解。配制好的MDA檢測工作液必須當(dāng)天使用。
c. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：取適量標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋至1、2、5、10、20、50μM，用于后續(xù)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果樣品中MDA的濃度很高，可以增加100、150和200μM的標(biāo)準(zhǔn)品濃度。
    3. 樣品測定:
a. 在離心管或其它適當(dāng)容器內(nèi)加入0.1ml勻漿液、裂解液或PBS等適當(dāng)溶液作為空白對照，加入0.1ml上述不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，加入0.1ml樣品用于測定；隨后加入0.2ml MDA檢測工作液。可參考下表設(shè)置檢測反應(yīng)體系：

b. 混勻后，100℃或沸水浴加熱15分鐘。加熱時務(wù)必注意避免液體暴沸濺出。如果使用加熱塊(Heat block)進(jìn)行加熱注意用重物壓緊離心管蓋；如果使用沸水浴，則需使用可把蓋子鎖死的離心管或螺旋蓋離心管，或用Parafilm封住離心管口，用針頭刺一小孔。最方便和準(zhǔn)確的加熱方法是使用帶有熱蓋并可以加熱0.5ml PCR管的PCR儀。
c.水浴冷卻至室溫，1000g室溫離心10分鐘。取200微升上清加入到96孔板中，隨后用酶標(biāo)儀在532nm測定吸光度。如果不方便測定532nm的吸光度，也可以測定530-540nm之間的吸光度。可以設(shè)定450nm為參考波長進(jìn)行雙波長測定。
d. MDA含量的計(jì)算：對于血漿、血清或尿液等樣品可以直接根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算獲得MDA的摩爾濃度，對于細(xì)胞、或組織樣品，計(jì)算出樣品溶液中的MDA含量后，可以通過單位重量的蛋白含量或組織重量等來表示最初樣品中的MDA含量，例如μmol/mg蛋白或μmol/mg組織。
常見問題：

沒有檢測到MDA?？赡軜悠分蠱DA濃度過低。在檢測組織或細(xì)胞的MDA時，請使用更多的組織或細(xì)胞。不要稀釋樣品。

特別提醒：

1) 本公司所有產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員用于生命科學(xué)研究，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅。

2) 本公司所有產(chǎn)品必須由合格專業(yè)技術(shù)人員操作同時佩戴口罩/手套/實(shí)驗(yàn)服并遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程！