后立即使用或分裝后-20℃凍存。

2）用組織培養(yǎng)基 1∶200 稀釋儲(chǔ)存液，配置工作液(終濃度 150μg/mL)。

3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。

4）待圖像分析前，向細(xì)胞內(nèi)添加 1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析。

Protocol 2：In vivo analysis / 活體成像分析

1）用無菌的 PBS（w/o Mg2+、Ca2+）配制 D-熒光素鈉鹽工作液(15mg/mL)，0.2um 濾膜過濾除菌。一旦

使用，保持冰冷且避光。

2）注射量取決于注射方式，具體如下：

3）注射入體內(nèi) 5-10 分鐘后，進(jìn)行成像分析。

（2）D-Luciferin, Potassium Salt/D-熒光素鉀鹽;

分子式：NaC₁₁H₇N₂O₃S₂·H₂O 分子量：320.32 g/mol 純度：高級(jí)純（99.7%）

應(yīng)用：1）活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi) luc 標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析；2）廣泛用于報(bào)告基因分析，免疫分析和 ATP 熒光衛(wèi)生監(jiān)測(cè)分析；

Protocol 1：In Vitro Bioluminescent Assays/ 體外生物發(fā)光檢測(cè)

1）配制成 100 mM 的儲(chǔ)存液（200×，濃度 30mg/ml）?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。

2）用預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基 1∶200 稀釋儲(chǔ)存液，配制工作液(終濃度 150μg/mL)。

3）去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基直至無殘留。

4）圖像分析前立即向細(xì)胞內(nèi)添加 1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析（或者細(xì)胞放在 37℃短時(shí)間孵育后

檢測(cè)可增強(qiáng)信號(hào)）。

Protocol 2：In vivo analysis in mice / 小鼠活體成像分析

1）用無菌的 DPBS（w/o Mg2+、Ca2+）配制 D-熒光素鉀鹽溶液(15mg/mL)，0.2um 濾膜過濾除菌。一旦

使用，保持冰冷且避光。

2）按 10 μL/g 體重的濃度向每支小鼠注射相應(yīng)量的 15mg/mL 熒光素溶液；

3）腹腔注射 10-15 min 后進(jìn)行成像分析。（對(duì)每只動(dòng)物模型做熒光素動(dòng)力學(xué)研究以確定峰值信號(hào)獲取時(shí)間）

（3）D-Luciferin Firefly,free acid/D-螢火蟲熒光素

分子式：C₁₁H₈N₂O₃S₂ 分子量：280.330 g/mol 外觀：白色至淺黃色粉末

溶解：0.25%濃度溶解于甲醇，形成近乎無色至淺黃色的清夜  

保存：-15°C 避光

應(yīng)用：1）活細(xì)胞、組織或生物體內(nèi) luc 標(biāo)記基因和熒光素酶-融合基因體內(nèi)/體外表達(dá)的成像分析；

2）廣泛用于報(bào)告基因分析，免疫分析和 ATP 熒光衛(wèi)生監(jiān)測(cè)分析；

注意事項(xiàng)

1) 本品（firefly luciferin）和甲蟲熒光素（beetle luciferin）都是指化合物(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazolyl) -2-thiazoline-4-carboxylic acid，僅僅是不同公司在命名上的差異。2) 本品保存和操作的過程中都要避光。另外水溶性儲(chǔ)存液過濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融。如果有條件，對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤猓ǚ乐寡趸?，穩(wěn)定性和保存時(shí)間更長(zhǎng)，長(zhǎng)達(dá)1年。3) 注射方式，動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定最佳信號(hào)平臺(tái)期和最佳的檢測(cè)時(shí)間。4) 熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒有差別，兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻(xiàn)來看，鉀鹽的使用率遠(yuǎn)高于鈉鹽，尤其是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。兩者功效相同。5) 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。