測定意義：

脂質過氧化是動植物體內活性氧(ROS)氧化生物膜的過程，脂質過氧化物（LPO）是脂質過氧化過程的產(chǎn)物，即ROS與生物膜的磷脂、酶和膜受體相關的多不飽和脂肪酸的側鏈及核酸等大分子物質起脂質過氧化反應形成LPO，使細胞膜的流動性和通透性發(fā)生改變,最終導致細胞結構和功能的改變。因此，LPO常被作為機體氧化應激的一種指標，與某些疾病的病理過程，如腫瘤、化學中毒、感染、炎 癥、自身免疫疾病、動脈粥樣硬化（AS）及心腦血管疾病，以及衰老等生理過程密切相關。

測定原理：

LPO在酸性條件下加熱，產(chǎn)生小分子終產(chǎn)物MDA，MDA與硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成紅色產(chǎn)物，在535nm有最大吸收峰。

組成：

臨用前注意試劑二是否完全溶解，如未溶解，可以70℃-90℃加熱，并振蕩以促進溶解。

自備儀器和用品：

酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

LPO提?。?

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長到535 nm。

2、在EP管中依次加入如下試劑

立即混勻，95℃水浴40min后，流水冷卻。3000g離心10min，吸取200μl上清加入96孔板，測定535nm下各管吸光值，記作A測定和A空白。ΔA=A測定-A空白。

LPO含量計算：

用96孔板測定的計算公式如下

y = 0.5723x - 0.0076，R² = 0.9997，x為標準品濃度μmol/ml，y為吸光度。

1、血清（漿）中LPO含量的計算：

LPO含量(nmol/ ml)=（ΔA+0.0076）÷0.5723×V標÷V樣×1000

=1747.3×（ΔA+0.0076）

2、細菌、細胞或動物組織中LPO含量計算

（1）按照蛋白濃度計算

LPO含量(nmol/ mg prot)=（ΔA+0.0076）÷0.5723×V標÷(Cpr×V樣)×1000

=1747.3×（ΔA+0.0076）÷Cpr

需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒。

（2）按照樣品質量計算

LPO含量(nmol/g 鮮重)=（ΔA+0.0076）÷0.5723×V標÷(W ×V樣÷V樣總)×1000

=1747.3×（ΔA+0.0076）÷W

 (3 ) 按照細菌或細胞密度計算：

LPO含量(nmol/10⁴)=（ΔA+0.0076）÷0.5723×V標÷(500×V樣÷V樣總)×1000

=3.495×（ΔA+0.0076）

V標：標準曲線中加入標品體積，0.03ml；V樣：加入樣本體積，0.03 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數(shù)，500萬；1000，μmol到nmol換算系數(shù)。