胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）檢測試劑盒（微量法100T/96S）
| 貨號 | SH0110 | 售價（元） | 624 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產品簡介
- 相關產品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0110 |
胞漿異檸檬酸脫氫酶（ICDHc）檢測試劑盒（微量法100T/96S） |
100管/96樣 |
正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸，同時還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細胞質中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源，在逆境中該酶活性通常會發(fā)生顯著變化。
測定原理：
利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應，在340 nm下測定NADPH濃度的增加。
組成：
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產品名稱 |
SH0110-100T/96S |
Storage |
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提取液： |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
19ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。
2、 將試劑二和試劑三轉移至試劑一中充分溶解；在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、 在微量石英比色皿或96孔板中加入10μl樣本和190μl試劑一，混勻后立即記錄340nm處20s后吸光值A1和 2min20s后的吸光值A2，計算ΔA=A2-A1。
注意事項：
1、 若A2-A1大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。計算公式中乘以相應稀釋倍數。
2、 若A2-A1小于0.005，可延長反應時間到5min或10min。
ICDHc活力單位的計算：
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、血清（漿）ICDHc活力的計算:
單位的定義：每ml血清（漿）每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=1608×ΔA
2、組織、細菌或細胞中ICDHc活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=1608×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/104）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=3.216×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。
b.用96孔板測定的計算公式如下
1、血清（漿）ICDHc活力的計算：
單位的定義：每ml血清（漿）每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/ml）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=3216×ΔA
2、組織、細菌或細胞中ICDHc活力的計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=3216×ΔA÷W
（3） 按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
ICDHc（nmol/min/104）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(500×V樣÷V樣總) ÷T=6.432×ΔA
V反總：反應體系總體積，2×10-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬。