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谷氨酰胺酶檢測試劑盒(分光光度 50T/48S)

貨號 SH0127 售價(元) 780
規(guī)格 50T/48S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

SH0127

谷氨酰胺酶(glutaminase, GLS) 活性測定試劑盒(分光光度 50T/48S)

50管/48樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定                                             

測定意義:

GLSEC 3.5.1.1是酰胺基水解酶,催化天冬酰胺水解成谷氨酸和氨,在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用,尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。

測定原理:

GLS催化谷氨酰胺水解成L-谷氨酸和氨,利用奈氏試劑檢測氨增加的速率,即可計算其酶活性。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0127-50T/48S

Storage

試劑一:液體

60 ml

4℃

試劑二:液體

20 ml

4℃

試劑三:液體

30 ml

常溫

試劑四:液體

10 ml

常溫

試劑五:液體

6 ml

常溫

試劑六:液體

6 ml

常溫避光

說明書

一份

 

自備儀器和用品:

臺式離心機、可見分光光度計、水浴鍋、1ml玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1、細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量

104個):試劑一體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬細菌或細胞加入1ml試劑一),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);

8000g4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,

加入1ml試劑一),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

1、分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至420nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣品測定(在EP中加入下列試劑):

試劑名稱(μl

測定管

對照管

樣本

25

 

蒸餾水

 

25

試劑一

100

100

試劑二

400

400

混勻,37℃水浴1 小時

試劑三

525

525

混勻,8000 g,25℃離心10 min;取上清液,EP管中加入下列試劑

         上清液

650

650

試劑四

150

150

試劑五

100

100

試劑六

100

100

混勻,室溫靜置15min,420nm處讀取吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管。對照管只要做一管。

注意:

1、試劑六如出現(xiàn)沉淀,靜置后取上清使用。

2、ΔAA測定管-A對照管)若出現(xiàn)負值,可能是酶活性較低,可將反應(yīng)時間1h延長到2h,相應(yīng)的在計算公式中除以2

酶活性計算:

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y =3.8488x +0.0057,R2 = 0.9983;;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/ml),y為吸光值A

1、血清(漿)GLS活性

單位定義:每ml血清(漿)每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個酶活力單位。GLSnmol /min /ml)= (ΔA-0.0057) ÷3.8488×V反總÷V÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057)

 2、組織、細菌或細胞GLS活性

1)按樣本蛋白濃度計算:

單位定義:每mg蛋白質(zhì)每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個酶活力單位。

GLSnmol /min /mg prot)= (ΔA-0.0057) ÷3.8488×V反總÷(V×Cpr)÷T×1000=181.8×(ΔA -0.0057)÷Cpr

2)按樣本鮮重計算:

單位定義:每g組織每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個酶活力單位。

GLSnmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0057)÷3.8488×V反總÷(W×V÷V樣總)÷T×1000

=181.8×(ΔA -0.0057)÷W

3)按細菌或細胞密度計算

單位定義:每1萬個細菌或細胞每min催化谷氨酰胺生成1nmol 氨定義為一個酶活力單位。GLSnmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0057) ÷3.8488×V反總÷(500× V÷V樣總)÷T×1000

=0.3637×(ΔA-0.0057)

V樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時間,60min;V反總:反應(yīng)體系總體積,1.05ml;V樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.025mlCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mlW:樣本質(zhì)量,g500:細菌或細胞總數(shù),500; 1000,μmolnmol換算系數(shù)。