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亞硝酸還原酶（NiR）檢測試劑盒(微量法100T/48S)
| 貨號 | SH0144 | 售價（元） | 1560 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0144 |
亞硝酸還原酶（NiR）檢測試劑盒(微量法100T/48S) |
100T/48S |
測定意義：
硝酸還原酶（NiR）是一類能催化亞硝酸鹽還原的酶，廣泛存在于微生物及植物體內(nèi)，是自然界氮循環(huán)過程中的關(guān)鍵酶，可以將亞硝酸鹽降解為NO或NH3，從而減少環(huán)境中亞硝態(tài)氮的積累，降低因亞硝酸鹽累積而造成的對生物體的毒害作用。
測定原理：
亞硝酸還原酶可將NO2—還原為NO，使樣品中參與重氮化反應生成紫紅色化合物的NO2—減少，即540nm處吸光值的變化可反映亞硝酸還原酶的活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0144-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
112ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
4ml |
4℃ |
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試劑二：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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試劑三：液體 |
5ml |
4℃ |
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試劑四：液體 |
10ml |
4℃避光 |
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試劑五：液體 |
10ml |
4℃避光 |
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說明書 |
一份 |
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試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加5ml蒸餾水溶解。
試劑三：液體5ml×1瓶，4℃保存。（如出現(xiàn)沉淀可以70-80℃加熱溶解）
試劑四：液體10ml×1瓶，4℃避光保存。（如出現(xiàn)沉淀可以70-80℃加熱溶解）
工作液：臨用前根據(jù)用量將試劑四和試劑五以1:1的比例混合。
自備儀器和用品：
天平、研缽、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、水浴鍋、低溫離心機。
酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2．細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000g，4℃離心10min，取上清置于冰上待測。
測定操作表：
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空白管 |
對照管 |
測定管 |
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樣本（μl） |
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20 |
20 |
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蒸餾水（μl） |
20 |
40 |
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試劑一（μl） |
40 |
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40 |
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試劑二（μl） |
40 |
40 |
40 |
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混勻后，25℃反應1h |
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試劑三（μl） |
40 |
40 |
40 |
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充分震蕩30S |
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上清液（μl） |
70 |
70 |
70 |
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工作液（μl） |
140 |
140 |
140 |
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充分混勻，，靜置3min后測定各管540nm處吸光值，分別記為A空白管、A對照管、A測定管?？瞻坠苤灰鲆还?，每個測定管需設一個對照管。 |
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計算公式：
a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 1.3594x + 0.0072，R2 = 0.9997；x為標準品濃度（μmol/ml），y為吸光值（A標準管-A空白管）。
1．按照蛋白含量計算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每小時還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。
NiR（μmol/h /mg prot）= [A空白管-(A測定管-A對照管)-0.0072]÷1.3594×V標÷（V樣×Cpr）÷T = 1.47×（A空白管-A測定管+A對照管-0.0072）÷Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
酶活單位定義：每克組織每小時還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。
NiR（μmol/h/g 鮮重）=[A空白管-(A測定管-A對照管)-0.0072]÷1.3594×V標÷（W ×V樣÷V樣總）÷T = 1.47×（A空白管-A測定管+A對照管-0.0072）÷W
3. 按照細胞數(shù)量計算
酶活單位定義：每104個細胞每小時還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。
NiR（μmol/h /104 cell）= [A空白管-(A測定管-A對照管)-0.0072]÷1.3594×V標÷（細胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T = 1.47×（A空白管-A測定管+A對照管-0.0072）÷細胞數(shù)量
V標：標準液體積，0.04ml；V樣：體系中加入樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，1h； Cpr：樣本蛋白含量；W：樣本質(zhì)量，g
b. 使用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.6797x + 0.0072，R2 = 0.9997；x為標準品濃度（μmol/ml），y為吸光值（A標準管-A空白管）。
1．按照蛋白含量計算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每小時還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。
NiR（μmol/h /mg prot）= [A空白管-(A測定管-A對照管)-0.0072]÷0.6797×V標÷（V樣×Cpr）÷T = 2.94×（A空白管-A測定管+A對照管-0.0072）÷Cpr
2. 按照樣本質(zhì)量計算
酶活單位定義：每克組織每小時還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。
NiR（μmol/h/g 鮮重）=[A空白管-(A測定管-A對照管)-0.0072]÷0.6797×V標÷（W ×V樣÷V樣總）÷T = 2.94×（A空白管-A測定管+A對照管-0.0072）÷W
3. 按照細胞數(shù)量計算
酶活單位定義：每104個細胞每小時還原1μmol NO2ˉ的量為一個酶活力單位。
NiR（μmol/h /104 cell）= [A空白管-(A測定管-A對照管)-0.0072]÷0.6797×V標÷（細胞數(shù)量×V樣÷V樣總）÷T = 2.94×（A空白管-A測定管+A對照管-0.0072）÷ 細胞數(shù)量
V標：標準液體積，0.04ml；V樣：體系中加入樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，1h； Cpr：樣本蛋白含量；W：樣本質(zhì)量，g
注意事項：
2. 若吸光值超過1.5，將上清液進行適當?shù)南♂尯笤偌尤牍ぷ饕猴@色，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3. 嚴格控制顯色時間，否則會對結(jié)果有影響。
4. 標準曲線線性范圍為0.03μmol/ml-1.5μmol/ml。
5. A空白管-（A測定管-A對照管）線性范圍為0.02-1.5。