歡迎蒞臨南京沃博生物科技有限公司官方網(wǎng)站!

當(dāng)前位置: 首頁(yè) - 產(chǎn)品目錄 - 生化試劑盒

纖維素酶(CL)檢測(cè)試劑盒(微量法100T/48S)

貨號(hào) SH0177 售價(jià)(元) 1320
規(guī)格 100T/48S CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號(hào)

名稱

規(guī)格

SH0177

纖維素酶(CL)檢測(cè)試劑盒(微量法100T/48S)

 100管/48樣

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義:

CLEC 3.2.1.4存在于細(xì)菌、真菌和動(dòng)物體內(nèi),能夠催化羧甲基纖維素降解,是一類可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、棉紡、環(huán)保及可再生資源利用等領(lǐng)域的酶制劑。

測(cè)定原理:

采用蒽酮比色法測(cè)定CL催化羧甲基纖維素鈉降解產(chǎn)生的還原糖的含量。

組成:

產(chǎn)品名稱

SH0177-100T/48S

Storage

提取液:液體

100ml

4℃

試劑一:液體

6ml

4℃

試劑二:液體

40ml

4℃

試劑三:粉劑

1

4℃

說(shuō)明書

一份

試劑三:粉劑×1瓶,4℃保存; 臨用前加入5ml蒸餾水和45ml濃硫酸充分溶解待用。

自備儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、濃硫酸和蒸餾水。

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備: 

1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

3、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

加樣表和測(cè)定步驟:

試劑名稱

對(duì)照管

測(cè)定管

樣本

50

50

試劑一(μl 

 

90

試劑二(μl 

370

370

蒸餾水(μl 

180

90

37℃振蕩反應(yīng)1h后,90℃水浴15min(蓋緊,防止水分散失),冷卻后

8000g 25℃離心10min,取上清,得糖化液

糖化液 (μl)

140

140

試劑三 (μl)

260

260

混勻, 90℃水浴10min(蓋緊,防止水分散失),冷卻,取200μl至微量石英比色皿或96孔板中,測(cè)620nm下吸光值A,計(jì)算ΔA=A測(cè)定管-A對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

CL活力計(jì)算:

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 5.018x - 0.0462;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/ml),y為吸光值。

2、血清(漿)CL活力的計(jì)算

單位的定義:每ml血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

CL活力(μg /min/ml)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總]÷V÷T =39.8×(ΔA+0.0462)

3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中CL活力的計(jì)算

1)按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

CL活力(μg /min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總]÷(V×Cpr) ÷T

=39.8×(ΔA+0.0462) ÷Cpr

2)按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

CL活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總]÷(W× V÷V樣總) ÷T

=39.8×(ΔA+0.0462) ÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

CL活力(μg /min /104 cell)=[1000×(ΔA+0.0462) ÷5.018×V反總]÷(500×V÷V樣總) ÷T

=0.0796×(ΔA+0.0462)

10001mg/ml=1000ug/ml;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.6ml; V樣:加入樣本體積,0.05 ml;V樣總:加入提取液體積,1 mlT:反應(yīng)時(shí)間,60 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。

b.96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、標(biāo)準(zhǔn)條件測(cè)定回歸方程為y = 2.5090x - 0.0462;x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/ml),y為吸光值。

2、血清(漿)CL活力的計(jì)算

單位的定義:每ml血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

CL活力(μg /min/ml)= [1000×(ΔA+0.0462) ÷2.509×V反總]÷V÷T =79.6×(ΔA+0.0462)

3、細(xì)胞、細(xì)菌和組織中CL活力的計(jì)算

1)按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

CL活力(μg /min /mg prot)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V反總]÷(V×Cpr)÷T

=79.6×(ΔA+0.0462) ÷Cpr

2)按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義:每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

CL活力(μg /min /g鮮重)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V反總]÷(W× V÷V樣總)÷T

=79.6×(ΔA+0.0462)÷W

3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義:每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1μg 葡萄糖定義為一個(gè)酶活力單位。

CL活力(μg /min /104cell)=[1000×(ΔA+0.0462)÷2.509×V反總]÷(500×V÷V樣總)÷T

=0.1592×(ΔA+0.0462)

10001mg/ml=1000ug/ml;V反總:反應(yīng)體系總體積,0.6ml; V樣:加入樣本體積,0.05 ml;V樣總:加入提取液體積,1 ml;T:反應(yīng)時(shí)間,60 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500萬(wàn)。