當前位置： 首頁 - 產(chǎn)品目錄 - 生化試劑盒
中性木聚糖酶（NEX）測定試劑盒(微量法100T/48S)
| 貨號 | SH0213 | 售價（元） | 864 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關產(chǎn)品
|
貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
|
SH0213 |
中性木聚糖酶（NEX）測定試劑盒(微量法100T/48S) |
100管/48樣 |
測定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養(yǎng)物質的吸收利用，因而廣泛的應用于釀造和飼料工業(yè)中，NEX一般分離自最適生長pH為6-8的微生物。
測定原理：
NEX在中性環(huán)境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與3,5-二硝基水楊中發(fā)生顯色反應，在540nm處有特征吸收峰，反應液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應液在540nm吸光值增加速率，可計算NEX活力。
組成：
|
產(chǎn)品名稱 |
SH0213-100T/48S |
Storage |
|
緩沖液：液體 |
65ml |
4℃ |
|
試劑一：液體 |
10ml |
4℃避光 |
|
試劑二：液體 |
10ml |
4℃避光 |
|
說明書 |
一份 |
|
試劑一：液體10ml×1瓶，4℃避光保存。（若出現(xiàn)白色絮狀或顆粒狀沉淀，可60℃加熱溶解后使用）。
自備儀器和用品：
天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋，可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
粗酶提?。?/span>
1. 發(fā)酵液：發(fā)酵液于8000g，4℃，離心15min，取上清，作為待測樣品。
2. 酶干粉：稱約0.1mg，加1ml緩沖液溶解待測。
3. 組織樣本：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml緩沖液）進行冰浴勻漿，然后8000g，4℃，離心10min，取上清待測。
測定操作表：
1、 分光光度計/酶標儀預熱30min，調節(jié)波長至540nm。
2、 操作表
|
|
對照管 |
測定管 |
|
樣品（μl） |
60 |
60 |
|
緩沖液（μl） |
90 |
90 |
|
試劑一（μl） |
|
60 |
|
試劑二（μl） |
90 |
|
|
混勻，蓋緊瓶蓋，50℃水浴，反應30min，立即沸水浴20min滅活。(注意不要讓蓋子爆開，以免進水，改變了反應體系) |
||
|
試劑一（μl） |
60 |
|
|
試劑二（μl） |
|
90 |
|
混勻，沸水浴顯色5min，取200μL于微量石英比色皿/96孔板中540nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。 |
||
NEX計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 1.6904x + 0.0058，R2 = 0.9989
1. 按液體體積活力計算：
酶活定義：50℃，pH6.0條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX活力（nmol/min/ml）= （ΔA-0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106
= 657× (ΔA-0.0058)
2. 按蛋白濃度計算：
酶活定義：50℃，pH6.0條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA -0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr
= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷Cpr
3. 按鮮重計算：
酶活定義：50℃，pH6.0條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX活力（nmol/min/g鮮重）= （ΔA -0.0058）÷1.6904÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W
= 657×(ΔA -0.0058 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反應時間，30min；稀釋倍數(shù)=V反總÷V樣=300μL÷60μL=5；
106：轉化因子，即1mg/ml=106ng/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質量，g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.8452x + 0.0058，R2 = 0.9989
1. 按液體體積活力計算：
酶活定義：50℃，pH6.0條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX活力（nmol/min/ml）= （ΔA-0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106
= 1315× (ΔA-0.0058)
2. 按蛋白濃度計算：
酶活定義：50℃，pH6.0條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA -0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr
= 1315×(ΔA -0.0058 ) ÷Cpr
3. 按鮮重計算：
酶活定義：50℃，pH6.0條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。
NEX活力（nmol/min/g鮮重）= （ΔA -0.0058）÷0.8452÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W
= 1315×(ΔA -0.0058 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反應時間，30min；稀釋倍數(shù)=V反總÷V樣=300μL÷60μL=5；
106：轉化因子，即1mg/ml=106ng/ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質量，g。
注意事項：
1. 吸光度變化應該控制在0.01~0.8之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應改變；也可以延長或者縮短反應時間。
2. 試劑盒2-8℃保存，保質期3個月，建議盡快使用。