測(cè)定意義：

GBSS（EC 2.4.1.21）以束縛態(tài)存在于淀粉體中，催化淀粉鏈的加長(zhǎng)反應(yīng)，主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。

測(cè)定原理：

GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時(shí)生成ADP；進(jìn)一步通過(guò)反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH，其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比，通過(guò)340nm下測(cè)定NADPH的增加量，可以計(jì)算GBSS活性。

組成：

SH0274-25T/24S試劑二臨用前加入7ml試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

SH0274-25T/24S試劑三臨用前加入4ml試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

SH0274-25T/24S試劑四臨用前加入9ml試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

SH0274-25T/24S試劑五臨用前加入0.5ml蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

SH0274-25T/24S試劑六臨用前加入0.5ml蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

SH0273-50T/48S試劑二臨用前加入14ml試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

SH0273-50T/48S試劑三臨用前加入8ml試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

SH0273-50T/48S試劑四臨用前加入17ml試劑一充分混勻備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

SH0273-50T/48S試劑五臨用前加入1ml蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

SH0273-50T/48S試劑六臨用前加入1ml蒸餾水，充分溶解備用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液制備：

稱取0.1~0.2g組織（建議稱取約0.1g組織），加入1ml提取液，冰浴中勻漿。10000g ，4℃離心10min，棄上清，在沉淀中加入1ml提取液充分混勻，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、在EP管中按順序加入下列試劑

混勻，30℃保溫20 min，置沸水浴中1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻

混勻，30℃保溫30 min，置沸水浴中1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻，10000g 4℃離心10min，取上清液（如果一次性測(cè)定樣本較多，可將試劑四、五和六按比例配成混合液）

混勻后立即340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。

注意：試劑二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。

GBSS活性計(jì)算：

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

GBSS（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V樣) ÷T×稀釋倍數(shù)

                =529×ΔA÷Cpr

此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

2、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

GBSS活性（nmol/min /g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×10⁹]÷（V樣÷V樣總×W）÷T×稀釋倍數(shù)

                    =529×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，7.8×10^-4 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.15 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；稀釋倍數(shù)：1.9；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量。