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支鏈/直鏈/總淀粉含量檢測(cè)試劑盒(微量法100T/96S)

貨號(hào) SH0295 售價(jià)(元) 3120
規(guī)格 100T/96S CAS號(hào)
  • 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
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貨號(hào)

名稱(chēng)

規(guī)格

存儲(chǔ)

SH0295

支鏈/直鏈/總淀粉含量檢測(cè)試劑盒(微量法100T/96S)

100T/96S

按要求存儲(chǔ)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

谷物淀粉中的直鏈淀粉最常見(jiàn)的測(cè)定方法是對(duì)直鏈淀粉的碘結(jié)合能力進(jìn)行電位法、電流法或比色法測(cè)量,從而形成直鏈淀粉-碘包合復(fù)合物。然而,這些方法存在不確定性。支鏈淀粉-碘復(fù)合物也會(huì)形成,它們會(huì)降低通過(guò)非比色法測(cè)量的游離碘的濃度,并且可能會(huì)在與比色法中的直鏈淀粉-碘復(fù)合物相似的波長(zhǎng)處吸收。

本試劑盒利用伴刀豆球蛋白A只與支鏈淀粉結(jié)合而不與直鏈淀粉結(jié)合的特性,使其分離,再用僅水解淀粉的酶復(fù)合物使淀粉水解為葡萄糖,通過(guò)檢測(cè)葡萄糖含量得到直鏈、 支鏈和總淀粉的含量。

 

保存條件:

未配制前在規(guī)定存儲(chǔ)條件下6個(gè)月內(nèi)有效,配制使用后在規(guī)定存儲(chǔ)條件下3個(gè)月內(nèi)有效。(各組分詳細(xì)儲(chǔ)存條件見(jiàn)瓶身)

 

試劑盒組成與配置

試劑名稱(chēng)

儲(chǔ)存條件

SH0295-100T/96S

配制過(guò)程

試劑一

-20

粉劑 mg×1

ConA

 

用前甩幾下試劑落入底部,再加25mlConA溶劑將其溶解備用,用前可分為適當(dāng)大小的小份,并在使用之間儲(chǔ)存在-10℃以下的聚丙烯管中,如有可能,在使用過(guò)程中保持冷卻。未配制時(shí)-20℃穩(wěn)定2年以上,配制使用后在-20℃穩(wěn)定1~3個(gè)月

試劑二

-20

粉劑 mg×1

 

用前甩幾下試劑落入底部,將瓶中內(nèi)容物溶解在10 ml酸鈉緩沖液(100 mM,pH 4.5)中。分為適當(dāng)大小的等分試樣,并在使用期間儲(chǔ)存在-10℃以下的聚丙烯管中,如有可能,在使用過(guò)程中保持冷卻,未配制時(shí)-20℃穩(wěn)定2年以上,配制使用后在-20℃穩(wěn)定1~3個(gè)月

試劑三

4

液體 500ml×1

 

試劑四

-20

粉劑 mg×1

 

60ml試劑三緩沖液溶解試劑四中的內(nèi)容物,并將其定量轉(zhuǎn)移到含有剩余試劑三緩沖液的瓶子中。用鋁箔蓋住這個(gè)瓶子,以保護(hù)密封的試劑不受光照。未配制時(shí)2-5℃-10℃下存放超過(guò)12個(gè)月,配制使用后在2-5℃-20℃可穩(wěn)定1~3個(gè)月

 

標(biāo)準(zhǔn)品

4

液體5ml×1

 

D-葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(5 ml,1.0 mg/ml

 

1. 所需的儀器和用品

2. 酶標(biāo)儀、196孔板、水浴鍋、可調(diào)式移液器、冰、 二甲基亞砜(DMSO,分析級(jí))、乙醇、乙酸和蒸餾水

2. 需配試劑:

乙酸鈉緩沖液(100 mM,pH 4.5):

900 ml蒸餾水中添加5.9 ml冰醋酸(1.05 g/ml)。通過(guò)添加1 M4 g/100 ml)氫氧化鈉溶液(需要大約30 ml),將pH值調(diào)節(jié)至pH 4.5,加入0.2g疊氮化鈉,調(diào)節(jié)體積至1L,室溫下穩(wěn)定2年以上。

濃縮ConA溶劑(600 mMpH 6.4醋酸鈉緩沖液):

稱(chēng)取49.2 g無(wú)水乙酸鈉,175.5 g氯化鈉,0.5 g 二水合氯化鈣,0.7 g六水合氯化鎂和0.7 g 四水合氯化錳,后加入900ml蒸餾水。逐滴加入冰醋酸,調(diào)節(jié)pH6.4(不能低于 6.4,否則重新配置),然后

用蒸餾水將其定容至1L。(在4℃下穩(wěn)定2周)

  ConA溶劑(工作濃度):用蒸餾水將30ml濃縮ConA溶劑稀釋至100ml(比例為3 7),現(xiàn)用現(xiàn)配。

淀粉含量測(cè)定:

1.準(zhǔn)確稱(chēng)量淀粉或面粉樣品10mg,放入 旋蓋式樣品管中。(注意:每個(gè)批次都包括一個(gè)參考樣品,復(fù)制每五個(gè)測(cè)試樣品)

2.向試管中加入0.5ml DMSO,同時(shí)在渦旋混合器上以低速輕輕地?cái)嚢?,蓋上管子,在沸水浴中加熱,直到樣品完全分散(約1分鐘),確保沒(méi)有凝膠狀的淀粉塊存在。

3.在渦旋混合器上高速攪拌密封管中的內(nèi)容物,并將管子放入沸水中。渦流混合器,將試管置于沸水浴中,加熱15min,并用渦旋混合器間歇性高速攪拌。

4. 加熱結(jié)束后立即加入 1 ml 乙醇(95%(v/v)),在渦旋混合器上加入,防止結(jié)塊,在渦旋混合器上持續(xù)攪拌。再加入2 ml 乙醇(95%(v/v)),蓋上管子并倒置以混合,淀粉沉淀會(huì)形成,讓試管靜置 15min。(如果需要,可以過(guò)夜)

5. 將試管以2,000g離心5分鐘,棄去上清液,在紙巾上瀝干10min,確保所有的乙醇都已排空,將顆粒用于在隨后的直鏈淀粉和總淀粉測(cè)定中。

注意:每批樣品中都包括一個(gè)參考樣品,重復(fù)的每五份測(cè)試樣品都要重復(fù)。

6. 1ml DMSO(輕輕渦旋混合)加入淀粉顆粒中。將試管放在沸水浴中15min,并不時(shí)攪拌,確保沒(méi)有凝膠狀的塊狀物。

7. 將試管從沸水浴中取出后,立即加入2ml ConA溶劑,充分混合,然后定量轉(zhuǎn)移試管。將試管內(nèi)容物定量轉(zhuǎn)移(用ConA溶劑反復(fù)洗滌)到25 ml容量瓶中,并定容至12.5ml,即為待測(cè)液。注:若是谷物樣本,第6步得到的溶液中有雜質(zhì),需待自然冷卻 5min 后于3000rpm 室溫(25℃,低于 10℃會(huì)結(jié)凍)離心 5min,上清液備用;若是純淀粉樣本,第6步得到的 溶液呈澄清狀,不需離心自然冷卻 5min 備用(此步驟對(duì)于檢測(cè)結(jié)果是必要的)注意:該溶液應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行分析。

上機(jī)檢測(cè):

1.酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,條件波長(zhǎng)至 510nm,空白檢測(cè)管調(diào)零。

2.直鏈淀粉上清液制備, EP 管中依次加入:

試劑名稱(chēng)

直鏈淀粉測(cè)定管(ml

待測(cè)液

1ml

試劑

0.25ml

反復(fù)顛倒混勻(不能渦旋)幾下,靜置 1 小時(shí), 14000rpm 室溫離心 10min,上清液待測(cè)

上清液

0.5 ml

乙酸鈉緩沖液 100 mMpH 4.5

1.5 ml

95-100℃煮沸 5min 后,40℃溫育 5min, 觀察:有沉淀產(chǎn)生

試劑

0.05 ml

混勻,40℃ 水浴 30min后,2000g室溫離心5min, 上清液待測(cè)

3.總淀粉上清液制備 EP 管中依次加入:

試劑名稱(chēng)

總淀粉測(cè)定管(ml

待測(cè)液

0.25 ml

乙酸鈉緩沖液 100 mMpH 4.5

2 ml

試劑

0.05 ml

40℃ 水浴 30min 后待測(cè)

4.顯色反應(yīng)

試劑名稱(chēng)

直鏈淀粉測(cè)定管(ml

總淀粉測(cè)定管(ml

空白管(僅做一次)

標(biāo)準(zhǔn)管(僅做一次)

樣品

0.5ml(直鏈淀粉上清液)

0.5 ml(總淀粉上清液)

0.5 ml(乙酸鈉緩沖液(100 mM,pH 4.5))

0.05 ml(標(biāo)準(zhǔn)品)+0.45 ml(乙酸鈉緩沖液(100 mM,pH 4.5

顯色 混合液)

2 ml

2ml

2 ml 

2 ml

混勻,40℃水浴避光20min, 510nm 處讀取吸光值 A

反應(yīng)結(jié)束后將0.2ml液體轉(zhuǎn)移至96孔板中,于510nm處讀數(shù);

計(jì)算:

直鏈淀粉 % (w/w)= 吸光度(直鏈淀粉 ×6.15 ×100

                   吸光度(總淀粉)     9.2  1

                 = 吸光度(直鏈淀粉 ×66.8

                   吸光度(總淀粉)     

其中6.159.2分別是直鏈淀粉和總淀粉提取物的稀釋系數(shù),淀粉提取物的稀釋系數(shù)。

注意事項(xiàng):

1、二甲亞砜作為皮膚刺激物,因此應(yīng)謹(jǐn)慎使用。它通過(guò)皮膚吸收,會(huì)對(duì)皮膚和眼睛造成刺激。使用時(shí)穿戴防護(hù)品并避免濺出溶劑,盡可能在通風(fēng)柜中使用。

2. 刀豆球蛋白 A 通過(guò)吸入、皮膚接觸和攝入有害。影響可能是不可逆的并且可能涉及致畸作用。處理結(jié)晶 Con A 時(shí)穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)用品,處理含有 Con A 的溶液時(shí)佩戴手套。