測定意義：

土壤磷酸酶是催化土壤有機磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，是評價土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強度的指標(biāo)。磷酸酶活性受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH的顯著影響，根據(jù)最適PH范圍，一般把土壤磷酸酶分為中性、酸性和堿性三種類型。

測定原理：

中性環(huán)境中，S-NP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，通過測定酚的生成量即可計算出NP活性。

試劑組成和配制：

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。用前加50ml蒸餾水充分溶解。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1152μl無水乙醇（自備），48 μl蒸餾水充分溶解。（變褐色后不能再使用）。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1瓶，0.5 μmol/ml酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、1ml玻璃比色皿、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

催化反應(yīng)：

稱取風(fēng)干混勻土壤約0.1g，加入50μl甲苯（自備），輕搖15min；加400μl試劑一并且搖勻后，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱，開始計時，催化反應(yīng)24h；到時后迅速加入1ml試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應(yīng)。8000g，25℃離心10min，取上清液置于冰上待測。

顯色反應(yīng)：

1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取1ml玻璃比色皿，加入50 μl蒸餾水，100 μl試劑三，20 μl試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水830 μl，混勻后25℃靜置30 min，于660 nm測定吸光度，記為A空白管。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取1ml玻璃比色皿，加入50 μl標(biāo)準(zhǔn)液，100 μl試劑三，20 μl試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水830 μl，混勻后25℃靜置30 min，于660 nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 測定管：取1ml玻璃比色皿，加入50 μl上清液，100 μl試劑三，20 μl試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水830 μl，混勻后25℃靜置30 min，于660 nm測定吸光度，記為A測定管。

注意事項：

空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

S-NP活性計算：

活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放1nmol酚為1個酶活單位。

S-NP（μmol/d/g 土樣）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總÷W÷T

= 0.725×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：0.5μmol/ml；V總：催化體系總體積，1.45ml；W：土壤樣品質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時間，24 h=1 d。