測定意義：

土壤總磷包括有機磷和無機磷，其中無機磷能夠直接被植物利用。土壤有機磷經(jīng)過礦化分解而轉(zhuǎn)化為無機磷。同時測定土壤總磷、有機磷和無機磷，可以全面反映土壤磷營養(yǎng)狀況。

測定原理：

利用鉬藍法定磷。取一份土樣，通過浸提法測定土壤無機磷含量；另外取一份土樣，經(jīng)高溫灼燒后，土壤有機磷轉(zhuǎn)化為無機磷，測得土壤總磷含量；總磷含量減去無機磷含量，即可計算出有機磷含量。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋10倍后再用。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入8ml蒸餾水，充分溶解后加入4ml試劑二，混勻。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支，20 μmol/L無機磷標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存。

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、臺式離心機、可調(diào)式水浴鍋，分析天平、可調(diào)式移液器、550℃高溫電爐、蒸餾水、100目篩子（可更小）。

土壤不同形態(tài)磷提取：

1.無機磷：稱取通過100目篩子的風(fēng)干土樣0.01g，轉(zhuǎn)移到1ml離心管，加入1ml試劑一，震蕩混勻，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃離心10min，取上清液一，用于無機磷含量測定。

2.總磷提?。喝⊥?/span>過100目篩子的風(fēng)干土樣，550℃灼燒1h，冷卻后稱取約0.01g，轉(zhuǎn)移到1 ml離心管，加入1ml試劑一，震蕩混勻，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃離心10min，取上清液二，用于總磷含量測定。

測定步驟：

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2.打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到40℃。

3. 空白管：取EP管，依次加入100μl蒸餾水，100μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，依次加入10μl標(biāo)準(zhǔn)液，90μl蒸餾水，100μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

5. 測定管：取EP管，依次加入10μl上清液一或者上清液二，90μl蒸餾水，100μl試劑三，混勻后置于40℃水浴保溫10min，室溫冷卻10 min后于660 nm測定吸光度，記為A測定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

土壤磷含量計算：

a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1.土壤無機磷含量（μmol /g 干重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V總÷W =0.02×(A測定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V總：上清液一總體積，1 ml=0.001 L。

2.土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V總÷W=0.02×(A測定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V總：上清液二總體積，1ml=0.001 L。

3.土壤有機磷（μmol /g干重）=土壤總磷-土壤無機磷

b. 使用96孔板測定的計算公式如下

1.土壤無機磷含量（μmol /g 干重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V總÷W =0.02×(A測定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V總：上清液一總體積，1 ml=0.001 L。

2. 土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)]×V總÷W=0.02×(A測定－A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)－A空白)÷W

C標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V總：上清液二總體積，1ml=0.001 L。

4.土壤有機磷（μmol /g 干重）=土壤總磷-土壤無機磷。

注意事項：

試劑三配制過程中，可能會產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果，注意吸取時不要將黑色固體吸入。