測(cè)定意義：

硝態(tài)氮是指硝酸鹽中所含有的氮元素，土壤中的有機(jī)物分解生成銨鹽，被氧化后變?yōu)橄鯌B(tài)氮。土壤中硝態(tài)氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接關(guān)系到作物的產(chǎn)量與品質(zhì)。

測(cè)定原理：

在濃酸條件下，NO^3-與水楊酸反應(yīng)，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在堿性條件下（PH>12）呈黃色，在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與含量成正比，可比色測(cè)定計(jì)算得硝態(tài)氮含量。

試劑組成和配制：

試劑一：粉劑×2支，4℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每支加1ml濃硫酸充分溶解。

自備儀器和用品：

蒸餾水、天平、常溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、振蕩儀。

樣本處理：

按照土壤質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g新鮮土樣，加入1mL蒸餾水）加入蒸餾水，置于振蕩儀中振蕩提取1h，25℃，10000g離心10min，取上清待測(cè)。

測(cè)定操作表：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至410nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表（于EP管中加入下列試劑）：

混勻，渦旋振蕩，使出現(xiàn)的沉淀充分溶解，轉(zhuǎn)移200uL至微量石英比色皿/96孔板中測(cè)定410nm處吸光值A，△A=A測(cè)定管-A空白管。

計(jì)算公式：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0156x+0.0073，R²=0.9997

NO₃^—— N含量（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V樣總） =64.1×（△A-0.0073）÷W

V樣總：加入提取液體積，1ml，W：樣本質(zhì)量，g

b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0078x+0.0073，R²=0.9997

NO₃^—— N（mg/kg鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V樣總）=128.2×（△A-0.0073）÷W

V樣總：加入提取液體積，1ml，W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)：

1、硝酸根不為土壤膠體吸附，且易溶于水，很容易在土壤內(nèi)部移動(dòng)，所以測(cè)定此指標(biāo)時(shí)應(yīng)注意采樣深度一致。

2、土壤經(jīng)風(fēng)干或者烘干很容易引起NO₃^—— N的變化，所以最好采用新鮮土壤進(jìn)行測(cè)定，以準(zhǔn)確反映該指標(biāo)含量。

3、試劑一配制好后盡快使用，4℃可保存一周。

4、試劑一和試劑二均具有強(qiáng)腐蝕性，操作時(shí)需做好防護(hù)措施。

5、最低檢出限為100μg/kg。