測定意義：

速效磷是土壤中可被植物吸收的磷組分，包括全部水溶性磷、部分吸附態(tài)磷及有機(jī)態(tài)磷，土壤中速效磷是限制植物生長主要因子之一。

測定原理：

用弱堿性提取堿溶性磷和吸附態(tài)磷，用鉬銻抗比色法測定。

試劑組成和配制：

試劑二： 粉劑×1支，4℃避光保存。臨用前加2ml蒸餾水溶解。用不完的試劑4℃保存。

試劑三： 粉劑×3支，4℃避光保存。臨用前加1ml蒸餾水溶解。現(xiàn)配現(xiàn)用。

自備儀器和用品：

天平、常溫離心機(jī)、可見分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、震蕩儀。

樣本處理：

新鮮土樣風(fēng)干，過30-50目篩，按照土壤質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：20的比例（建議稱取約0.05g土樣，加入1ml提取液），振蕩提取1h，10000g ，25℃離心10min，取上清液待測。

測定步驟：

1、取試劑三一支，加入1ml蒸餾水充分溶解待用。

2、顯色液的配制（可測50個樣）：取EP管一支，加入660μl試劑一，再加入100μl試劑二，充分混勻后，再加入240μl試劑三，充分混勻待用；配好的顯色液應(yīng)為黃色，若變藍(lán)則為磷污染；顯色液必須現(xiàn)配現(xiàn)用；若一次性測不了50個樣，可按比例縮小各試劑體積。

3、操作表：

注意事項(xiàng)：

1、配好的顯色液當(dāng)天用完，變藍(lán)則不能使用。

2、最低檢出限為0.2μg/ml。

計算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.1164x-0.012，R² = 0.9958，x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/L），y為吸光值。

速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.012）÷ 0.1164×V樣÷（W×V樣÷V樣總）

                     = 8.591×（△A+0.012）÷W

V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.04ml；V樣總：加入提取液體積，1ml，W：樣本質(zhì)量，約0.05g

b. 用96孔板測定的計算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0582x-0.012，R² = 0.9958，x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/L），y為吸光值。

速效磷含量（mg/kg干重）=（△A+0.012）÷ 0.0582×V樣÷（W×V樣÷V樣總）

                     = 17.182×（△A+0.012）÷W

V樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.04ml；V樣總：加入提取液體積，1ml，W：樣本質(zhì)量，約0.05g