測定意義：

甜菜堿是一種廣泛分布于動植物及微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿，是生物體內(nèi)膽堿的氧化產(chǎn)物，可以增強(qiáng)免疫力、降血脂、抗氧化、抗腫瘤，并可作為甲基供體，參與促進(jìn)動物蛋白質(zhì)和脂肪代謝、增進(jìn)食欲、緩和應(yīng)激、調(diào)節(jié)滲透壓、穩(wěn)定維生素等多種生物作用，在化工、醫(yī)藥、食品添加劑等領(lǐng)域有較廣泛的應(yīng)用。

測定原理：

甜菜堿在強(qiáng)酸條件下和雷氏鹽發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生沉淀，沉淀用丙酮溶解形成紅色溶液，在525nm處有特征吸收峰，測定525nm處的吸光值，可計算得樣品的甜菜堿含量。

組成：

試劑一：粉劑3瓶，4℃保存，臨用前根據(jù)用量配制，每瓶加40ml蒸餾水溶解，加780μl濃鹽酸調(diào)pH為1。

試劑二：99%乙醚，自備。取無水乙醚99ml，加入蒸餾水1ml，混勻。

試劑三：70%丙酮，自備。（易揮發(fā)，根據(jù)用量自備，丙酮：蒸餾水=7:3）。

自備儀器和用品：

天平、離心機(jī)、可見分光光度計、1ml玻璃比色皿、乙醚、鹽酸、丙酮和蒸餾水。

測定步驟：

1、 分光光度計預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至525nm。

2、操作表

甜菜堿含量計算公式：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 1.004x + 0.0057，R² = 0.9993；x為甜菜堿濃度（mg/ml），y為吸光值。

甜菜堿含量（mg/g 干重）=（ΔA-0.0057）÷1.004× V標(biāo)準(zhǔn)÷(V樣÷V樣總×W)

                  =1.99×（ΔA-0.0057）÷W

V標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)品體積，1.2ml；V樣：反應(yīng)中樣本體積，1.2ml；V樣總：加入提取液體積，2ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項：

1、 試劑一配制時pH嚴(yán)格控制為1，否則會導(dǎo)致反應(yīng)不完全，配制后4℃只能穩(wěn)定幾個小時，配制后盡快使用。

2、 試劑二與試劑三對呼吸道有一定的刺激，請做好防護(hù)工作。