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脂肪酶(LPS)檢測試劑盒(分光光度法50T/48S)
貨號 | SH0462 | 售價(元) | 420 |
規(guī)格 | 50T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
SH0462 |
脂肪酶(LPS)檢測試劑盒(分光光度法50T/48S) |
50管/48樣 |
測定意義:
LPS又稱甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和單酯)。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。
測定原理:
LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用銅皂法測定脂肪酸生成速率,即可計算LPS活性。
組成:
產(chǎn)品名稱 |
FA013-50T/48S |
Storage |
試劑一:液體 |
90ml |
4℃ |
試劑二:液體 |
14ml |
4℃ |
試劑三:甲苯(自備) |
100ml |
4℃ |
試劑四:液體 |
20ml |
4℃ |
標(biāo)準(zhǔn)品:液體 |
10μl |
4℃ |
說明書 |
一份 |
試劑二:液體14ml×1瓶,4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。
標(biāo)準(zhǔn)品:液體10μl×1瓶,10 μmol/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液,4℃保存。臨用前加入3.168 ml甲苯,充分溶解。
自備儀器和用品:
研缽、臺式離心機、震蕩混勻器、可見分光光度計、1ml玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、甲苯100ml、冰和蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。12000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1ml試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后12000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體: 直接檢測。
LPS測定操作:
1. 分光光度計預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長到710 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一和試劑二置于37℃水浴預(yù)熱30min以上。
2. 在5ml EP管中依次加入下列試劑
試劑名稱(μl) |
空白管 |
測定管 |
蒸餾水 |
375 |
|
樣本 |
|
125 |
試劑一 |
750 |
750 |
試劑二 |
|
250 |
37℃振蕩反應(yīng)10 min
試劑三 |
2000 |
2000 |
37℃振蕩反應(yīng)10 min后,8000g,25℃,離心10min,取上清液
試劑名稱(μl) |
空白管 |
測定管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
上清液 |
1200 |
1200 |
|
標(biāo)準(zhǔn)品 |
|
|
1200 |
試劑四 |
300 |
300 |
300 |
37℃振蕩反應(yīng)5 min后,靜置5min,取800μl上層液加入1 ml玻璃比色皿,于710nm處測定吸光值。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。
LPS活性計算公式:
1. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞LPS活性
(1)按照蛋白濃度計算
活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷(Cpr×V樣)÷T
=16×[(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=16×[(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷W
(3)按照細(xì)菌或者細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義:37℃中每104個細(xì)胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol /min/104cell) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=16×[(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷細(xì)胞數(shù)量
2. 血清等液體LPS活性
活性單位定義:37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol /min/ml) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷V樣÷T
=16×[(A測定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]
C標(biāo)準(zhǔn)品:10 μmol/ml;V反總:反應(yīng)總體積,2ml;V樣:反應(yīng)中加入樣本體積,0.125ml;V樣總:加入提取液體積,1ml;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/ml,需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒;W:樣本質(zhì)量,g;T:催化反應(yīng)時間,10 min。