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脂肪酶(LPS)檢測試劑盒(分光光度法50T/48S)

貨號 SH0462 售價(元) 420
規(guī)格 50T/48S CAS號
  • 產(chǎn)品簡介
  • 相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱

規(guī)格

SH0462

脂肪酶(LPS)檢測試劑盒(分光光度法50T/48S)

50管/48樣

正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定                                             

測定意義:

LPS又稱甘油酯水解酶,催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油(或者甘油二酯和單酯)。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。

測定原理:

LPS催化油酯水解成脂肪酸,利用銅皂法測定脂肪酸生成速率,即可計算LPS活性。

組成:

產(chǎn)品名稱

FA013-50T/48S

Storage

試劑一:液體

90ml

4℃

試劑二:液體

14ml

4℃

       試劑三:甲苯(自備)

100ml

4℃

試劑:液體

20ml

4℃

標(biāo)準(zhǔn)品:液體

10μl

4℃

說明書

一份

 

試劑二:液體14ml×1瓶,4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。

標(biāo)準(zhǔn)品:液體10μl×1瓶,10 μmol/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液,4℃保存。臨用前加入3.168 ml甲苯,充分溶解。

自備儀器和用品:

研缽、臺式離心機、震蕩混勻器、可見分光光度計、1ml玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、甲苯100ml、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(ml)15~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1ml試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。12000g,4℃離心10min,取上清置冰上待測。

2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(ml)為500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1ml試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后12000g4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體: 直接檢測。

LPS測定操作:

1. 分光光度計預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長到710 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一和試劑二置于37℃水浴預(yù)熱30min以上。

2. 5ml EP管中依次加入下列試劑

試劑名稱(μl

空白管

測定管

蒸餾水

375

 

樣本

 

125

試劑一

750

750

試劑二

 

250

37℃振蕩反應(yīng)10 min

試劑三

2000

2000

37℃振蕩反應(yīng)10 min后,8000g25℃,離心10min,取上清液

試劑名稱(μl

空白管

測定管

標(biāo)準(zhǔn)管

上清液

1200

1200

 

標(biāo)準(zhǔn)品

 

 

1200

試劑四

300

300

300

37℃振蕩反應(yīng)5 min后,靜置5min,取800μl上層液加入1 ml玻璃比色皿,于710nm處測定吸光值。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

LPS活性計算公式:

1. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞LPS活性

1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol/min/mg prot) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷Cpr×V樣)÷T

=16×[(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷Cpr

2)按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義:37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷W×V÷V樣總)÷T

=16×[(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]÷W

3)按照細(xì)菌或者細(xì)胞數(shù)量計算

活性單位定義:37℃中每104個細(xì)胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol /min/104cell) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V÷V樣總)÷T

=16×[(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)細(xì)胞數(shù)量

2. 血清等液體LPS活性

活性單位定義:37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。

LPS (μmol /min/ml) = [C標(biāo)準(zhǔn)品×(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]×V反總÷V÷T

=16×[(A測定管-A空白管A標(biāo)準(zhǔn)管- A空白管)]

C標(biāo)準(zhǔn)品:10 μmol/mlV反總:反應(yīng)總體積,2ml;V樣:反應(yīng)中加入樣本體積,0.125ml;V樣總:加入提取液體積,1ml;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/ml,需要另外測定,建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒;W:樣本質(zhì)量,g;T:催化反應(yīng)時間,10 min。