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磷脂酶A2（PLA2）檢測試劑盒（微量法100T/48S）
| 貨號 | SH0479 | 售價（元） | 8160 |
| 規(guī)格 | 100T/48S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0479 |
磷脂酶A2（PLA2）檢測試劑盒（微量法100T/48S） |
100T/48S |
測定意義：
磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂sn-2位脂酰基水解酶，廣泛存在于動植物組織、細菌、細胞核分泌物中，參與脂肪消化，精子成熟、細胞信號傳遞、脂質(zhì)過氧化修復(fù)、宿主反應(yīng)等生理過程，在控制體內(nèi)磷脂類物質(zhì)平衡、調(diào)節(jié)機體新陳代謝、參與疾病的病理進程等方面發(fā)揮著及其重要的作用。
測定原理：
磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸膽堿（HEPC）產(chǎn)生游離巰基，與DTNB反應(yīng)生成黃色物質(zhì)，在412nm處有特征吸收峰。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0479-100T/48S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
20ml |
4℃避光 |
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試劑三：液體 |
5瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑三：液體×5瓶，-20℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每瓶加入1.8ml試劑二充分混勻；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
自備儀器和用品：
天平、超速冷凍離心機、研缽、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。
樣品處理：
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1ml提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1ml試劑一。
2. 細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10000g離心5min，取全部上清于4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于1ml試劑一。
3. 血清：直接測定。
4.
測定操作:
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對照管 |
測定管 |
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樣品（μl） |
20 |
20 |
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試劑二（μl） |
180 |
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試劑三（μl） |
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180 |
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充分混勻，37℃反應(yīng)10min，于微量石英比色皿/96孔板，蒸餾水調(diào)零，測定412nm處吸光值，記為A對照管和A測定管，△A=A測定管- A對照管 |
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酶活計算公式:
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（
×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
= 73.53×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（
×d）×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 73.53×△A÷W
3. 細胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細胞每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/104 cell）= △A÷（
×d）×V反總÷（V樣×細胞數(shù)量÷V樣總）÷T
= 73.53×△A÷細胞數(shù)量
4按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/ml）= △A÷（
×d）×V反總÷V樣÷T
= 73.53×△A
：TNB消光系數(shù)，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，1ml；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.1ml；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1ml；
T：反應(yīng)時間，10min
b. 用96孔板測定的計算公式如下
1．按照蛋白濃度計算
酶活性定義：每毫克蛋白每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（
×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T
=147.06×△A÷Cpr
2．按照樣本質(zhì)量計算
酶活性定義：每克組織每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（
×d）×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T
= 147.06×△A÷W
3. 細胞數(shù)量計算
酶活性定義：每104個細胞每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/104 cell）= △A÷（
×d）×V反總÷（V樣×細胞數(shù)量÷V樣總）÷T
=147.06×△A÷細胞數(shù)量
4按照液體體積計算
酶活性定義：每毫升血清每分鐘水解HEPC產(chǎn)生1nmol游離巰基所需的酶量為一個酶活力單位。
PLA2活性（nmol/min/ml）= △A÷（
×d）×V反總÷V樣÷T
= 147.06×△A
：TNB消光系數(shù)，13600L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，1ml；V樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.1ml；W：樣本質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，1ml；
T：反應(yīng)時間，10min