測(cè)定意義：

果膠裂解酶（EC4.2.2.10）是果膠酶的重要組成部分，是一種能降解植物細(xì)胞壁，導(dǎo)致植物組織軟化甚至死亡的解聚酶，來源比較廣泛，主要來源于微生物，可用于果汁、果酒的澄清，提高水果出汁率，植物病毒的純化，紙漿的漂白和紡織品的生物精煉，在減少環(huán)境污染和降低能源消耗方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理：

果膠裂解酶作用于果膠中的α-1,4糖苷鍵，生成在還原端C4和C5之間位置具有不飽和鍵的不飽和寡聚半乳糖醛酸，在235nm處有特征吸收峰。

組成：

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、恒溫水浴鍋。

酶液提取：

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3、培養(yǎng)液：直接測(cè)定。

測(cè)定步驟：

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至235nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 操作表：

酶活性計(jì)算公式：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

1. 組織中PL活性

（1）按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 64.1×△A÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T

= 64.1×△A÷W

2. 細(xì)菌、真菌PL活性

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每10⁴個(gè)細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/10⁴cell）= △A ÷（ε×d）×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T

 = 64.1×△A÷細(xì)胞數(shù)量

3. 培養(yǎng)液PL活性

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/ml）= △A÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T

= 64.1×△A

ε：不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù)：5200L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min

b. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1. 組織中PL活性

（1）按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫克蛋白每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 128.2×△A÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每克組織每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/g 鮮重）= △A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T

= 128.2×△A÷W

2. 細(xì)菌、真菌PL活性

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每10⁴個(gè)細(xì)胞每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min/10⁴cell）=△A÷（ε×d）×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T

    = 128.2×△A÷細(xì)胞數(shù)量

3. 培養(yǎng)液PL活性

酶活性定義：在40℃，pH5.5條件下，每毫升培養(yǎng)液每分鐘分解果膠產(chǎn)生1nmol不飽和半乳糖醛酸所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。

PL活性（nmol/min//ml）= △A÷（ε×d）×V反總÷V樣÷T

= 128.2×△A

ε：不飽和半乳糖醛酸摩爾消光系數(shù)：5200L/mol/cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min。