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3-磷酸甘油酸激酶(PGK)檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/48S)
貨號(hào) | SH0527 | 售價(jià)(元) | 5040 |
規(guī)格 | 50T/48S | CAS號(hào) |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
貨號(hào) |
名稱 |
規(guī)格 |
SH0527 |
3-磷酸甘油酸激酶(PGK)檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/48S) |
50管/48樣 |
測(cè)定意義:
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關(guān)鍵酶,廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi),催化1,3-二磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變?yōu)?/span>3-磷酸甘油酸,產(chǎn)生1分子ATP,具有影響DNA復(fù)制和修補(bǔ)及刺激病毒RNA合成等生物學(xué)功能,廣泛應(yīng)用于藥物靶標(biāo)設(shè)計(jì)。
測(cè)定原理:
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產(chǎn)生1,3-二磷酸甘油酸和ADP,1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產(chǎn)生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸,340nm處的吸光度變化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
組成:
產(chǎn)品名稱 |
SH0527-50T/48S |
Storage |
提取液:液體 |
100ml |
4℃ |
試劑一:液體 |
25ml |
4℃避光 |
試劑二:粉劑 |
1瓶 |
-20℃避光 |
試劑三:粉劑 |
1瓶 |
-20℃避光 |
試劑四:粉劑 |
1瓶 |
-20℃避光 |
試劑五:粉劑 |
1瓶 |
-20℃避光 |
說明書 |
一份 |
試劑二:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加5ml蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加2.5 ml蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑四:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加2.5 ml蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑五:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加10 ml蒸餾水充分溶解;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
自備儀器和用品:
天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)、1 ml石英比色皿。
酶液提取:
①總PGK酶提取:建議稱取約0.1g樣本,加入1ml提取液,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,500g離心5min,取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體PGK酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1ml提取液),冰浴勻漿后于4℃,500g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測(cè)定胞漿PGK酶活性,取沉淀加1ml提取液,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,500g離心5min,取上清測(cè)定葉綠體中PGK酶活性。
建議測(cè)定總PGK酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的PGK,則按照步驟②提取粗酶液。
測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 取1ml石英比色皿,依次加入500μl試劑一,100μl試劑二,50μl試劑三,50μl試劑四,200μl 試劑五,100μl粗酶液,充分混勻,記錄340nm處10s的吸光值A1和310s的吸光值A2,△A=A1-A2
計(jì)算公式:
(1)按照樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義:每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PGK(nmol/min /mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義:每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PGK(nmol/min /g 鮮重)=ΔA÷(ε×d)×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,1ml;ε:NADH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1ml;V樣總:加入提取液體積,1ml;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g