測定意義：

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

測定原理：

強(qiáng)堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物；紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān)，故可用來測定蛋白質(zhì)含量。該方法測定范圍為1~10mg蛋白質(zhì)，適用于蛋白質(zhì)濃度高的樣品，尤其是動物材料

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

組成：

標(biāo)準(zhǔn)品：液體1ml×1瓶，5 mg/ml，4℃保存。

樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取：

1. 液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。

2. 組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）

3. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

測定步驟：

1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到540 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μl蒸餾水，1000μl試劑一，混勻后室溫靜置15 min，于540nm比色，記為A空白管。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μl標(biāo)準(zhǔn)液，1000μl試劑一，混勻后室溫靜置15 min，于540 nm比色，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

4. 測定管：取1 mL玻璃比色皿，加入200μl待測液，1000μl試劑一，混勻后室溫靜置15 min，于540nm比色，記為A測定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

樣品中蛋白質(zhì)濃度計算公式

C待測（mg/mL）= C標(biāo)準(zhǔn)管×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

                =5×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)

注意事項：

1.樣品蛋白濃度須在1~10mg/ml范圍內(nèi)，低于1mg/ml不能用此法，高于10mg/ml須做相應(yīng)稀釋。因此測定前用1~2個樣做預(yù)實驗，確保蛋白濃度在1~10mg/ml范圍內(nèi)。

2.待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的PBS提取。該法受硫酸銨、Tris緩沖液干擾，提取液中應(yīng)不含這些物質(zhì)；否則改用BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。