測(cè)定意義：

測(cè)定對(duì)象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測(cè)血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。

測(cè)定原理：

在酸性環(huán)境下，抗氧化物質(zhì)還原 Fe³⁺ -三吡啶三吖嗪(Fe³⁺ -TPTZ)產(chǎn)生藍(lán)色的 Fe²⁺ -TPTZ 的能力反映了總抗氧化能力。

組成：

混合液(現(xiàn)配現(xiàn)用)：將試劑一、試劑二、試劑三按 10:1:1 的比例混合，使用前 37℃預(yù)溫。

自備儀器和用品：

酶標(biāo)儀、低溫臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣品的制備：

(1) 血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品

血漿（制備時(shí)可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 離心10min，取上清待測(cè)。血清、唾液或尿液樣品直接用于測(cè)定，也可以-80℃凍存（不宜超過30 d）后再測(cè)定。

(2) 組織樣品

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

(3) 細(xì)胞樣品

按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入1ml 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至593nm。

2、 樣本測(cè)定

總抗氧化能力計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.2416x + 0.0134       R² = 0.9996        x:Trolox 濃度(μmol/ml)

y:吸光值差值△A

單位定義:用從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的抗氧化劑 Trolox 的量來表示樣本的總抗氧化能力。 

（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算

總抗氧化能力（μmol Trolox/g 鮮重）=（△A-0.0134）÷1.2416×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W)

=0.8054×（△A-0.0134）÷W

（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算

總抗氧化能力（μmol Trolox/mg prot）=（△A-0.0134）÷1.2416×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×Cpr)

=0.8054×（△A-0.0134）÷Cpr

（3）按細(xì)胞計(jì)算

總抗氧化能力（μmol Trolox/10⁴cell）=（△A-0.0134）÷1.2416×V 樣÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)

量（萬個(gè)））

= 0.8054×（△A-0.0134）÷ 細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）

（4）按液體體積計(jì)算

總抗氧化能力（μmol Trolox/ml）=（△A-0.0134）÷1.2416

=0.8054×（△A-0.0134）

V 樣總：加入提取液體積，1 ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，10μL；W：樣品質(zhì)量，g；

Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml 

注意事項(xiàng)：

1. 試劑二對(duì)人體有刺激性，請(qǐng)采取適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施。為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴乳膠手套操作。

2. 盡量避免使用在酸性條件下呈藍(lán)色或接近藍(lán)色的試劑，否則對(duì)本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾。

3. 樣品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢劑和 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反應(yīng)的還原劑