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淀粉總量檢測試劑盒(微量法100T/96S)
貨號 | SH0637 | 售價(元) | 3240 |
規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
SH0637 |
淀粉總量檢測試劑盒(微量法100T/96S) |
100T |
簡介
淀粉是人類飲食中主要的能量來源,它在多種食物中富含,如谷類、豆類、根莖類蔬菜和水果。淀粉在許多加工類食品和動物飼料中也占有相當大的比例,并以天然或化學(xué)改性的形式在工業(yè)上得到廣泛應(yīng)用。淀粉測定方法分為酸水解法和酶分析法,其中酸水解只能應(yīng)用干純淀粉樣品。針對不同的樣品,酶分析方法在前處理步驟上有所不同。經(jīng)典的AACC76-11法采用淀粉在高壓蒸汽滅菌鍋中及含水的條件下凝膠化,并用淀粉葡糖苷酶將淀粉轉(zhuǎn)化為葡萄糖,再測定葡萄糖含量,采用AACC76-11法會導(dǎo)致許多樣品和材料中包括高直鏈淀粉、玉米淀粉和谷物制品淀粉含量檢測結(jié)果偏低。近來,我們對檢測方法進行了改進,使耐熱α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶可以在相同的pH(pH=5.0)下進行孵育,這樣簡化了測定步驟,并將麥芽酮糖生成的可能性降到最低。淀粉總量試劑盒可測定大部分食品、飼料、植物和谷物制品(天然或加工過的),對于大部分樣品(如小麥粉)中的淀粉在孵育中(大約100℃并加入耐熱α-淀粉酶)會完全溶解;對于含有大量抗性淀粉的樣品(如高直鏈玉米淀粉)需用1.7M NaOH或熱DMSO進行預(yù)溶解;而含有可溶性淀粉或麥芽糊精的樣品,不需要用耐熱-淀粉酶處理。
產(chǎn)品性能
特異性:可用于測定-葡聚糖(包括淀粉、糖原、植物糖原和非抗性麥芽糊精)
靈敏度:最小吸光度差異為0.010吸光度單位。這相當于當樣品質(zhì)量為100mg時,總淀粉含量為0.09mg。
檢測限:吸光度差異為0.020吸光度單位。這相當于樣品質(zhì)量為100mg時,總淀粉含量為0.18mg。
檢測范圍:在5-100 μg D-葡萄糖范圍內(nèi)呈線性關(guān)系。重復(fù)檢測同一樣品溶液其吸光度值會有0.005-0.010吸光度單位的差異,如果樣品經(jīng)過稀釋,計算結(jié)果時需要乘以相應(yīng)的稀釋系數(shù)(F)。
檢測原理
(1)耐熱a-淀粉酶將淀粉水解為可溶性的、有支鏈的、無支鏈的麥芽糊精
(2)含大量抗性淀粉的樣品可以加入2 mol/L KOH混合均勻,在4℃下使抗性淀粉預(yù)溶解,然后用醋酸鈉緩沖液中和,最后用α-淀粉酶處理。也可以在100℃下,用DMSO溶解,再加入α-淀粉酶處理生成麥芽糊精。
(3)淀粉葡糖苷酶(AMG)將麥芽糊精定量水解成D-葡萄糖
(4)D-葡萄糖被葡萄糖氧化酶氧化成D-葡萄糖酸鹽,并釋放等摩爾的H2O2。再用過氧化物酶催化H2O2反應(yīng),產(chǎn)生的昆亞胺染料含量用比色法測定。
(5)過氧化氫被過氧化物酶催化生成水和氧氣,同時對羥基苯甲酸和4-氨基安替比林被氧化生成醌亞胺;這一過程可以通過比色反應(yīng)進行測定。
如果樣品中含高水平的D-葡萄糖和麥芽糊精,可在測定前用80%乙醇處理。一個樣品的檢測可以在70分鐘內(nèi)完成。
保存條件
未配制前在規(guī)定存儲條件下6個月內(nèi)有效,配制使用后在規(guī)定存儲條件下3個月內(nèi)有效(各組分詳細儲存條件見瓶身)。
試劑盒組成與配置
試劑名稱 |
儲存條件 |
SH0637-100T |
注意事項 |
試劑一 |
-20℃ |
液體10ml×1瓶 |
建議到貨后將該試劑分裝為,儲存在EP管中-20℃保存。在使用時,取出所需量的試劑,同時在使用過程應(yīng)盡量保持低溫。 |
試劑二 |
-20℃ |
液體10ml×1瓶 |
用之前可分為適當大小的等分試樣,儲存在-20℃以下的EP管中。在使用時,取出所需量的試劑,同時在使用過程應(yīng)盡量保持低溫。 |
試劑三 |
4℃ |
粉劑×1瓶 |
用之前加900ml蒸餾水溶解混勻,后用2M氫氧化鉀調(diào)節(jié)至pH7.4,最后用蒸餾水定容至1000ml,即為試劑三。 |
試劑四 |
-20℃ |
粉劑× 1瓶 |
用20ml試劑三溶解試劑四中的粉末,并將其定量轉(zhuǎn)移至試劑三的瓶子中。配制后的試劑要嚴格避光保存。(配制后的試劑在-20℃可穩(wěn)定保存1~3個月) 備注:如果該試劑要以冷凍狀態(tài)儲存,則最好將其分裝為小份,在使用過程中僅冷凍/解凍一次。 新制備試劑,其顏色為淺黃色或淺粉色。在2-3個月后,若該溶液將呈現(xiàn)出更強烈的粉紅色應(yīng)立即對照蒸餾水讀數(shù),吸光度應(yīng)小于0.05,若大于此數(shù)值,則表示該溶液不可再使用。 |
標準品 |
4℃ |
液體×1瓶 |
D-葡萄糖標準溶液(5 ml,1.0 mg/ml) |
1. 所需的儀器和用品:
2. 可見分光光度計/酶標儀、10mm玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、可調(diào)式移液器、離心機、磁力攪拌器、渦旋儀等
2. 需配試劑:
a、 醋酸鈉緩沖液(100 mM,pH 5.0)含CaCl2(5 mM):在900 ml蒸餾水中加入5.8 ml冰醋酸,后加入0.74 g二水合CaCl2并溶解,使用NaOH溶液將pH值調(diào)節(jié)到5.0,使用蒸餾水定容至1L,并在4°C下儲存緩沖液。
b、 醋酸鈉緩沖液(200mM,pH 4.5)含CaCl2(5 mM):向900 ml蒸餾水中添加11.6 ml冰醋酸,后加入0.74 g二水合CaCl2并溶解,使用氫氧化鈉溶液將pH值調(diào)整為4.5,使用蒸餾水定容至1L,并在4°C下儲存緩沖液。
c、 醋酸鈉緩沖液(600 mM,pH 3.8)含CaCl2(5 mM):向1600 ml蒸餾水中添加69.6 ml冰醋酸,后加入1.48 g二水合CaCl2并溶解,使用氫氧化鈉溶液將pH值調(diào)節(jié)至3.8,使用蒸餾水定容至2L,并在4°C下儲存緩沖液。
d、 NaOH溶液(1.7 M):稱取68g氫氧化鈉,加入900ml去離子水,攪拌溶解,將容量調(diào)整為1L并儲存在密封容器中,室溫保存。
e、 MOPS緩沖液(50mM,pH7.0)含CaCl2(5mM)、疊氮化鈉(0.02%):取11.55g MOPS(鈉鹽, Sigma cat. M-9381)加入900ml蒸餾水溶解, 后加入二水合CaCl2 0.74g,用HCl調(diào)節(jié)pH=7.0, 稱取疊氮化鈉0.2g 完全溶解, 然后調(diào)整到1L,并在4℃保存。
注:在調(diào)整pH值之前,不得添加疊氮化鈉,疊氮化鈉酸化會釋放出有毒氣體。
淀粉含量測定
(a) 不含抗性淀粉的樣品總淀粉含量的測定
1. 碾磨谷物、植物或食品,使用0.5mm孔徑的篩網(wǎng)進行分篩;
2. 準確稱取100 mg待測樣品,一式兩份(一份作為空白管)放入50ml離心管中;
3. 向兩支離心管中分別加入10ml緩沖液a:醋酸鈉緩沖液(100mM,pH 5.0)含CaCl2(5mM),使用渦旋移混勻5s;
4. 向其中一個離心管(樣品管)中添加0.1 ml未稀釋的試劑一,向第二根離心管(空白管)中加入0.1ml緩沖液a:醋酸鈉緩沖液(100mM,pH 5.0)含CaCl2(5mM),將管中液體混合均勻;
5. 輕輕旋上蓋子,將離心管轉(zhuǎn)移到100℃沸水浴中處理2min后,擰緊瓶蓋;在渦旋儀上用力混合離心管內(nèi)容物,過5min后,再次將離心管內(nèi)容物渦旋5s;然后將試管放回100℃沸水浴中15min,從沸水浴中取出試管,在渦旋儀上劇烈渦旋5s;最后將離心管放在50°C的水浴中平衡管內(nèi)溫度至少5min;
6. 向樣品管中添加0.1 ml未稀釋試劑二,渦旋3s,向空白管中添加0.1 ml緩沖液a:醋酸鈉緩沖液(100 mM pH 5.0)含CaCl2(5 mM);輕輕混勻后在50°C下處理樣品30min;
7. 從水浴鍋中取出離心管,室溫冷卻后將管子倒置幾次,使管蓋內(nèi)側(cè)的冷凝水與管內(nèi)的液體混合;
8. 從離心管(樣品管和空白管)中分別取出2.0 ml溶液轉(zhuǎn)移到5ml EP管中,以13000 rpm的轉(zhuǎn)速離心EP管5min并靜置5min;吸取1.0 ml上清液轉(zhuǎn)移到新的15ml離心管中,加入4 ml緩沖液a:醋酸鈉緩沖液(100 mM,pH 5.0)含CaCl2(5 mM),并將管內(nèi)液體混合均勻;
9. 分別從15ml離心管(樣品管和空白管)中吸取溶液0.05 ml到新的5ml EP管中;接著向管中加入1.5 ml 試劑四,輕輕混勻,在50°C下培養(yǎng)20min;反應(yīng)結(jié)束后吸取200ul液體轉(zhuǎn)移至96孔板中,于510nm處讀數(shù);
同時孵化:
標準管:0.05 ml葡萄糖標準溶液(1.0 mg/ml)加1.5 ml試劑四,一式四份;
空白管:0.05 ml 緩沖液a:乙酸鈉緩沖液(100 mM,pH 5.0)含CaCl2(5 mM)和1.5 ml試劑四,一式兩份。
與樣品管和空白管同時在50°C下培養(yǎng)20min;反應(yīng)結(jié)束后吸取200ul液體轉(zhuǎn)移至96孔板中,于510nm處讀數(shù);
10. 計算淀粉含量。
注:對于本提取方案,最終提取體積(EV)=10.2 稀釋度(D)=1、5或11
注1:如果樣品的吸光度值小于0.05,步驟8中離心后吸取上清,無需再添加緩沖液進行稀釋;如果吸光度值大于0.60,吸取離心后上清,可以加入10ml緩沖液a進行稀釋(稀釋度(D)=1、5或11)。
注2:當分析含有約20-30%淀粉的草和青貯飼料等纖維樣品時,使用攪拌機研磨樣品,研磨約60秒(直到樣品均勻為止)。步驟2中稱取樣品增加至500 mg進行后續(xù)實驗;步驟5中在100°C下沸水浴的處理時間延長至60min;步驟8中需要對樣品稀釋20倍再進行后續(xù)檢測(稀釋度(D)=20)。
(b) 含抗性淀粉樣品總淀粉含量的測定
1. 碾磨谷物、植物或食品,使用0.5mm孔徑的篩網(wǎng)進行分篩;
2. 準確稱取100mg待測樣品,一式兩份(一份作為空白管)放入50ml離心管中;
3. 向離心管中加入0.2ml 80%乙醇混合均勻,使樣品在離心管中均勻分散,該步驟非常重要;
4. 向離心管中添加2ml 1.7M NaOH溶液,并在渦旋儀上渦旋混勻15s;之后將離心管放在冰水浴中處理15min,在此期間需要間歇性在渦旋儀上渦旋3-5次,確保樣品中沒有結(jié)塊;
5. 向離心管中添加8 ml緩沖液c:醋酸鈉緩沖液(600 mM,pH 3.8)含CaCl2(5 mM),在渦旋儀上渦旋混勻;
6. 立即向樣品管中添加0.1 ml未稀釋的試劑一,然后再添加0.1 ml試劑二。向第二根離心管(空白管)中添加0.2 ml緩沖液a:醋酸鈉緩沖液(100 mM,pH 5.0)含CaCl2(5 mM),旋緊兩個離心管管蓋并渦旋混勻3s并將離心管放置在50°C下培養(yǎng)30min;
7. 從水浴鍋中取出離心管,室溫冷卻后將管子倒置幾次,使管蓋內(nèi)側(cè)的冷凝水與管內(nèi)的液體混合;
8. 從離心管(樣品管和空白管)中分別取出2.0 ml溶液轉(zhuǎn)移到5ml EP管中,以13000 rpm的轉(zhuǎn)速離心EP管5min并靜置5min;吸取1.0 ml上清液轉(zhuǎn)移到新的15ml離心管中,加入4 ml緩沖液a:醋酸鈉緩沖液(100 mM,pH 5.0)含CaCl2(5 mM),并將管內(nèi)液體混合均勻;
9. 分別從15ml離心管(樣品管和空白管)中吸取溶液0.05 ml到新的5ml EP管中;接著向管中加入1.5ml 試劑四,輕輕混勻,在50°C下培養(yǎng)20min;反應(yīng)結(jié)束后吸取200ul液體轉(zhuǎn)移至96孔板中,于510nm處讀數(shù);
同時孵化:
標準管:0.05 ml葡萄糖標準溶液(1.0 mg/ml)加1.5ml試劑四,一式四份。
空白管:0.05 ml緩沖液a:乙酸鈉緩沖液(100 mM,pH 5.0)加CaCl2(5 mM)和1.5 ml試劑四,一式兩份。
與樣品管和空白管同時在50°C下培養(yǎng)20min;反應(yīng)結(jié)束后吸取200ul液體轉(zhuǎn)移至96孔板中,于510nm處讀數(shù);
10. 計算淀粉含量。
注:對于本提取方案,最終提取體積(EV)=10.4 稀釋度(D)=1、5或11
注1:如果樣品的吸光度值小于0.050,步驟8中離心后吸取上清,無需再添加緩沖液進行稀釋;如果吸光度值大于0.60,吸取離心后上清,可以加入10ml緩沖液a進行稀釋(稀釋度(D)=1、5或11)。
(c) 不含抗性淀粉、D-葡萄糖和/或麥芽糊精的樣品總淀粉含量的測定
1. 碾磨谷物、植物或食品,使用0.5mm孔徑的篩網(wǎng)進行分篩;
2. 準確稱取100 mg待測樣品,一式兩份(一份作為空白管)放入50ml離心管中;
3. 向離心管中加入0.2ml 80%乙醇混合均勻,使樣品在離心管中均勻分散,該步驟非常重要;
4. 向離心管中添加3 ml稀釋后的試劑一(將試劑一用MOPS緩沖液(50 mM,pH 7.0)含CaCl2(5 mM)稀釋30倍),將離心管放入100℃沸水浴中孵育6min,在此期間需要間歇性在渦旋儀上渦旋3-5次充分混勻;
5. 將離心管轉(zhuǎn)入50°C的水浴鍋中,溫育5min;之后加入4 ml緩沖液b:醋酸鈉緩沖液(200 mM,pH 4.5)含CaCl2(5 mM),然后加入0.1ml試劑二,在渦旋儀上渦旋混勻,并在50°C下培養(yǎng)30min;
6. 將離心管中的全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到100 ml容量瓶中,用緩沖液b:醋酸鈉緩沖液(200 mM,pH 4.5)含CaCl2(5 mM)定容至100ml,并將瓶中液體混合;
7. 從容量瓶(樣品管和空白管)中分別取出2.0 ml溶液轉(zhuǎn)移到5ml EP管中,以13000 rpm的轉(zhuǎn)速離心EP管5min并靜置5min;
8. 分別從5ml EP管(樣品管和空白管)中吸取溶液0.05 ml到新的5ml EP管中;接著向管中加入1.5 ml 試劑四,輕輕混勻,在50°C下培養(yǎng)20min;反應(yīng)結(jié)束后吸取200ul液體轉(zhuǎn)移至96孔板中,于510nm處讀數(shù);
同時孵化:
標準管:0.05 ml葡萄糖標準溶液(1.0 mg/ml)加1.5 ml試劑四,一式四份。
空白管:0.05 ml緩沖液a:乙酸鈉緩沖液(100 mM,pH 5.0)加CaCl2(5 mM)和1.5ml試劑四,一式兩份。
與樣品管和空白管同時在50°C下培養(yǎng)20min;反應(yīng)結(jié)束后吸取200ul液體轉(zhuǎn)移至96孔板中,于510nm處讀數(shù);
9. 計算淀粉含量。
注:對于本提取方案,最終提取體積(EV)=100 稀釋度(D)=1
(d) 含有抗性淀粉但不含D-葡萄糖和/或麥芽糊精的樣品總淀粉含量的測定
1. 碾磨谷物、植物或食品,使用0.5mm孔徑的篩網(wǎng)進行分篩;
2. 準確稱取100 mg待測樣品,一式兩份(一份作為空白管)放入50ml離心管中;
3. 向離心管中加入0.2ml 80%乙醇混合均勻,使樣品在離心管中均勻分散,該步驟非常重要;
4. 向離心管中加入2ml二甲基亞砜(DMSO),并在渦旋儀上渦旋混勻,將離心管放入100℃沸水浴中處理5min,在此期間需要間歇性在渦旋儀上渦旋3-5次充分混勻;
5. 向離心管中添加3 ml稀釋后的試劑一(將試劑一用MOPS緩沖液(50 mM,pH 7.0)含CaCl2(5 mM)稀釋30倍),將離心管放入100℃沸水浴中孵育6min,在此期間需要間歇性在渦旋儀上渦旋3-5次充分混勻;
6. 將離心管轉(zhuǎn)入50°C的水浴鍋中,溫育5min;之后加入4 ml緩沖液b:醋酸鈉緩沖液(200 mM,pH 4.5)含CaCl2(5 mM),然后加入0.1ml試劑二,在渦旋儀上渦旋混勻,并在50°C下培養(yǎng)30min;
7. 將離心管中的全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到100 ml容量瓶中,用緩沖液b:醋酸鈉緩沖液(200 mM,pH 4.5)含CaCl2(5 mM)定容至100ml,并將瓶中液體混合;
8. 從容量瓶(樣品管和空白管)中分別取出2.0 ml溶液轉(zhuǎn)移到5ml EP管中,以13000 rpm的轉(zhuǎn)速離心EP管5min并靜置5min;
9. 分別從5ml EP管(樣品管和空白管)中吸取溶液0.05 ml到新的5ml EP管中;接著向管中加入1.5 ml 試劑四,輕輕混勻,在50°C下培養(yǎng)20min;反應(yīng)結(jié)束后吸取200ul液體轉(zhuǎn)移至96孔板中,于510nm處讀數(shù);
同時孵化:
標準管:0.05 ml葡萄糖標準溶液(1.0 mg/ml)加1.5 ml試劑四,一式四份。
空白管:0.05 ml緩沖液a:乙酸鈉緩沖液(100 mM,pH 5.0)加CaCl2(5 mM)和1.5ml試劑四,一式兩份。
與樣品管和空白管同時在50°C下培養(yǎng)20min;反應(yīng)結(jié)束后吸取200ul液體轉(zhuǎn)移至96孔板中,于510nm處讀數(shù);
10. 計算淀粉含量。
注:對于本提取方案,最終提取體積(EV)=100 稀釋度(D)=1
注1:二甲基亞砜作為皮膚刺激物,因此應(yīng)謹慎使用。它通過皮膚吸收,會對皮膚和眼睛造成刺激。使用時穿戴防護品并避免濺出溶劑,盡可能在通風(fēng)柜中使用。
(e) 含有D-葡萄糖和/或麥芽糊精的樣品總淀粉含量的測定
用乙醇洗滌去除D-葡萄糖和麥芽糊精
[注:麥芽糊精在乙醇水溶液中的溶解度主要取決于麥芽糊精的DP(聚合度)范圍、最終乙醇濃度和溶液溫度]。
1. 碾磨谷物、植物或食品,使用0.5mm孔徑的篩網(wǎng)進行分篩;
2. 準確稱取100 mg待測樣品,一式兩份(一份作為空白管)放入50ml離心管中;
3. 向50ml離心管中加入5.0 ml 80%乙醇并在80-85°C下培養(yǎng)5分鐘,使用渦旋儀渦旋混勻溶液,并補加5 ml 80%乙醇;
4. 在臺式離心機上,以3250xg離心10min,去除上清,保留沉淀;
5. 向離心管中加入5 ml 80%乙醇中重懸沉淀,并使用渦旋儀渦旋混勻,再加入5ml 80%乙醇,倒置混合,按照步驟4再次離心,并小心地倒出上清液;
6. 向離心管中添加3 ml稀釋后的試劑一(將試劑一用MOPS緩沖液(50 mM,pH 7.0)含CaCl2(5 mM)稀釋30倍),將離心管放入100℃沸水浴中孵育6min,在此期間需要間歇性在渦旋儀上渦旋3-5次充分混勻;
7. 將離心管轉(zhuǎn)入50°C的水浴鍋中,溫育5min;之后加入4 ml緩沖液b:醋酸鈉緩沖液(200 mM,pH 4.5)含CaCl2(5 mM),然后加入0.1ml試劑二,在渦旋儀上渦旋混勻,并在50°C下培養(yǎng)30min;
8. 將離心管中的全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到100 ml容量瓶中,用緩沖液b:醋酸鈉緩沖液(200 mM,pH 4.5)含CaCl2(5 mM)定容至100ml,并將瓶中液體混合;
8. 從容量瓶(樣品管和空白管)中分別取出2.0 ml溶液轉(zhuǎn)移到5ml EP管中,以13000 rpm的轉(zhuǎn)速離心EP管5min并靜置5min;
9. 分別從5ml EP管(樣品管和空白管)中吸取溶液0.05 ml到新的5ml EP管中;接著向管中加入1.5ml 試劑四,輕輕混勻,在50°C下培養(yǎng)20min;反應(yīng)結(jié)束后吸取200ul液體轉(zhuǎn)移至96孔板中,于510nm處讀數(shù);
同時孵化:
標準管:0.05 ml葡萄糖標準溶液(1.0 mg/ml)加1.5 ml試劑四,一式四份。
空白管:0.05 ml緩沖液a:乙酸鈉緩沖液(100 mM,pH 5.0)加CaCl2(5 mM)和1.5ml試劑四,一式兩份。
與樣品管和空白管同時在50°C下培養(yǎng)20min;反應(yīng)結(jié)束后吸取200ul液體轉(zhuǎn)移至96孔板中,于510nm處讀數(shù);
10. 計算淀粉含量。
注:對于本提取方案,最終提取體積(EV)=100 稀釋度(D)=1
(f) 淀粉以可溶性或懸浮形式存在的樣品中總淀粉含量的測定
1. 將液體樣品適量轉(zhuǎn)入50ml離心管中通過渦旋儀混勻,徹底混合樣品。可以加熱或使用均質(zhì)儀以獲得樣品的均勻懸浮液;
2. 使用移液器吸取100mg樣品轉(zhuǎn)入新的50ml離心管中,一式兩份(一份作為空白管);
后續(xù)步驟于提取方案(a)中步驟3~步驟10相同。
注:對于本提取方案,稀釋樣品體積(DSV)=10.2 ml,稀釋度(D)=1、5或11,樣品體積(SV)=5ml
(g) 懸浮態(tài)含抗性淀粉樣品中總淀粉含量的測定
1. 將液體樣品適量轉(zhuǎn)入50ml離心管中通過渦旋儀混勻,徹底混合樣品。可以加熱或使用均質(zhì)儀以獲得樣品的均勻懸浮液;
2. 使用移液器吸取100mg樣品轉(zhuǎn)入新的50ml離心管中,一式兩份(一份作為空白管);
后續(xù)步驟于提取方案(b)中步驟3~步驟10相同。
注:對于本提取方案,稀釋樣品體積(DSV)=12.2 ml,稀釋度(D)=1、5或11,樣品體積(SV)=2 ml
計算:
1.固體樣品的計算(mg):
淀粉含量,% = ΔA × F×(EV/0.1)×(1/1000)×D×(100/W)×(162/180)
=ΔA ×F ×EV ×(D/W) x 0.90
其中:
ΔA=相當于試劑空白讀取的吸光光度值(反應(yīng)) ;
F =吸光光度值轉(zhuǎn)換為葡萄糖重量(ug)的因子(100ug D-葡萄糖的重量/100μg D-葡萄糖的吸光光度值);
EV=最終體積樣品提取量:流程(a)為10.2 ml,流程(b)為10.4ml,流程(c)和(d)為100ml; 0.1=用于檢測的樣品體積;
D=樣品溶液的進一步稀釋倍數(shù)(未稀釋、稀釋5倍或稀釋11倍);
(1/1000)=從ug到mg的轉(zhuǎn)換;
(100/W)=一定重量干粉中淀粉含量的百分比值;
(162/180)=淀粉中游離的D-葡萄糖轉(zhuǎn)化為D-葡萄糖酐的因子;
淀粉含量,%(干重)=淀粉含量,%(上述算法結(jié)果) ×100/(100-含水量,%)
2.液體樣品的計算(mg/100 ml):
淀粉 = ΔA×F ×(DSV/SV)×(100/0.1)×(1/1000)×(162/180)×D
= ΔA × F×DSV/SV×0.9
ΔA=相當于試劑空白讀取的吸光光度值(反應(yīng)) ;
F =吸光光度值轉(zhuǎn)換為葡萄糖重量(ug)的因子(100μg D-葡萄糖的重量/100μg D-葡萄糖的吸光光度值);
DSV=稀釋樣品體積(即加入醋酸鹽緩沖液、α-淀粉酶和淀粉葡糖苷酶后的樣品體積);
SV=分析用樣品的體積:流程(f)為5 ml,流程(g)為2 ml;
100=換算成100ml樣品體積;
0.1=用于檢測的樣品體積;
(1/1000)=從μg到mg的轉(zhuǎn)換;
(162/180)=淀粉中游離的D-葡萄糖轉(zhuǎn)化為D-葡萄糖酐的的因子;
D=樣品溶液的進一步稀釋(未稀釋、稀釋5倍或稀釋11倍)
淀粉(g/100g樣品)=mg/100ml×100/樣品干重(mg/ml)
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