麥胚凝集素（Wheat Germ Agglutinin，WGA）是廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)的凝集素之一。WGA識別的糖類受體是 N-乙酰葡糖胺（GlcNAc），傾向與 N-乙酰葡糖胺的二聚體和三聚體結(jié)合。WGA 能結(jié)合含 N-乙酰葡 糖胺末端或殼二糖的寡糖，這類結(jié)構(gòu)在許多血清和膜來源糖蛋白中普遍存在。細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖、甲殼素（幾丁質(zhì)）、軟骨糖胺聚糖和糖脂也能結(jié)合 WGA。天然 WGA 還能通過 N-乙酰神經(jīng)氨酸（唾液酸）殘基與 一些糖蛋白相互作用。WGA 適用于胰島素受體的純化、血清蛋白和神經(jīng)示蹤。

麥胚凝集素（Wheat Germ Agglutinin，WGA）通常用來標(biāo)記糖蛋白，用于活細(xì)胞或固定細(xì)胞的質(zhì)膜成像， 用于組織切片染色或其它標(biāo)準(zhǔn)的免疫分析實驗。WGA 能用作一種革蘭氏染色劑，熒光標(biāo)記革蘭氏陽性菌（非革蘭氏陰性菌）。還能用于結(jié)合出芽酵母（比如釀酒酵母）的出芽痕。

本品是 Alexa Fluor 488 標(biāo)記的麥胚凝集素（Alexa Fluor 488 labeled Wheat Germ Agglutinin, Alexa Fluor 488- WGA），Ex/Em=495/519nm，親和純化所得，基本不含未標(biāo)記的熒光素。建議工作濃度范圍是 5-20μg/ml。

產(chǎn)品性質(zhì)

1） 英文同義名：Wheat Germ Agglutinin, Alexa Fluor 488 Conjugate; Alexa Fluor 488 labeled Wheat Germ Agglutinin; Wheat germ agglutinin lectin, Alexa Fluor 488 Conjugate; Alexa Fluor 488labeled WGA Lectin;

2） 中文同義名：麥胚凝集素，Alexa Fluor 488 標(biāo)記；Alexa Fluor 488 標(biāo)記的麥胚凝集素；Alexa Fluor 488

標(biāo)記的小麥胚芽凝集素；

3） 糖類特異性：N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）

4） 外觀：固體

5） Ex/Em：495/519nm

6） 熒光顏色：綠色

7） 應(yīng)用：IF、糖生物學(xué)

質(zhì)膜標(biāo)記操作流程

一、儲存液準(zhǔn)備

于使用前，將低溫保存的 Alexa Fluor 488-WGA（1mg）置于室溫回溫至少 30min，低速離心 2-3min，往管 內(nèi)加入 500μl ddH2O（無菌）制備 2mg/ml 儲存液。短時間使用可保存在 2-8℃，長時間使用請根據(jù)單次用量分裝保存后置于-20℃保存，避免反復(fù)凍融，至少一個月穩(wěn)定。

二、標(biāo)記活的真核細(xì)胞 以下是對貼壁培養(yǎng)在蓋玻片上的活細(xì)胞的通用染色步驟。用戶需根據(jù)不同的模型系統(tǒng)和預(yù)期效果來優(yōu)化染 色時間和濃度。

   2.1 制備染色工作液：用合適的生理緩沖液，比如：HBSS（無酚紅）或 HHBS，稀釋 Alexa Fluor 488-WGA（2mg/ml）儲存液到工作濃度，常用工作濃度范圍為 5-20μg/ml。 使用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋 WGA 偶聯(lián)物用于標(biāo)記可能導(dǎo)致增高的非細(xì)胞染色背景。

2.2  細(xì)胞標(biāo)記：加入足量的染色工作液完全覆蓋蓋玻片上的細(xì)胞。37℃孵育 10-30min。

   2.3 細(xì)胞清洗：標(biāo)記結(jié)束后，吸走染色工作液，用合適的緩沖液清洗細(xì)胞 2 次。除非細(xì)胞要做固定，此時即可在預(yù)熱的 HBSS 或其它適合于成像的緩沖液中封片。

   2.4 【可選】細(xì)胞固定：可能用 4%多聚甲醛固定染色好的細(xì)胞，37℃ 15min，之后用緩沖液清洗，以及做 另一種復(fù)染。如有必要用 0.2% Triton X-100 透化細(xì)胞。

三、標(biāo)記固定的真核細(xì)胞 以下是對貼壁培養(yǎng)、甲醛固定且未做透化處理細(xì)胞的通用染色步驟。用戶需根據(jù)不同的模型系統(tǒng)和預(yù)期效 果來優(yōu)化染色時間和濃度。

3.1 細(xì)胞固定：4%多聚甲醛固定細(xì)胞，37℃處理 15min。

3.2  細(xì)胞清洗：用 HBSS（不含酚紅）清洗細(xì)胞三次。不要透化細(xì)胞?。?！

   3.3 準(zhǔn)備染色工作液：用合適的生理緩沖液，比如：HBSS（無酚紅）或 HHBS，稀釋 Alexa Fluor 488-WGA（2mg/ml）儲存液到工作濃度，常用工作濃度范圍為 5-20μg/ml。 使用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋 WGA 偶聯(lián)物用于標(biāo)記可能導(dǎo)致增高的非細(xì)胞染色背景。

3.4  細(xì)胞標(biāo)記：加入足量的染色工作液完全覆蓋蓋玻片上的細(xì)胞。室溫孵育 10-30min。

   3.5 細(xì)胞清洗：標(biāo)記結(jié)束后，吸走染色工作液，用合適的緩沖液清洗細(xì)胞 2次。此時可能用 0.2% Triton X-100

或其它表面活性劑透化細(xì)胞，進(jìn)行接下來的復(fù)染或抗體標(biāo)記。

3.6 細(xì)胞成像：按照實驗需求用另一復(fù)染劑染色，之后在緩沖液內(nèi)封片或抗熒光淬滅劑來封片。

保存與運輸方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少 1 年有效。 運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 本品儲存液長期保存可能會產(chǎn)生沉淀，使用前請37℃溫育數(shù)分鐘，之后離心吸取上清使用。此操作基本不會對產(chǎn)生性能造成負(fù)影響。

2） 熒光染料都存在淬滅的問題，保存和操作過程中注意避光。

3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。