產(chǎn)品簡介：

Dispase中文名稱為中性蛋白酶，也稱為分散酶，是一種非特異性的金屬蛋白酶，被用來從各種不同組織或器官中消化細胞外基質(zhì)，釋放并制備原代單細胞；或用于細胞培養(yǎng)中的細胞收獲或接種轉(zhuǎn)移；也被用于防止懸浮細胞培養(yǎng)時的細胞意外結(jié)團。蛋白水解酶類，如胰蛋白酶、膠原酶和鏈酶蛋白酶都被用語來分散組織、分類細胞，但他們常傷害細胞，并且在培養(yǎng)時不穩(wěn)定，甚至可能引入支原體污染。Dispase就沒有這個問題，不會給細胞膜帶來傷害，而且因為其來自細菌，故不會引入支原體或任何動物病毒；溫度、pH、血清成分等的差異對Dispase影響很小。Dispase經(jīng)稀釋后其活性就大大降低，這也方便了后續(xù)的培養(yǎng)。Dispase甚至被加入細胞培養(yǎng)懸液中用于防止細胞團結(jié)。該酶具有以下優(yōu)勢：1）一種快速有效且溫和的細胞消化酶，對細胞損傷小，且能維持細胞膜完整性；2）來源于細菌，無支原體或其他動物病毒污染；3）穩(wěn)定性強，不受溫度、pH及血清組分的影響；4）可用于多種類型組織和細胞的分離等。本品非無菌Dispase II，來源于Bacillus polymyxa，使用時需對其除菌處理，用于細胞培養(yǎng)時常用工作濃度為0.6-2.4Uml。

產(chǎn)品性質(zhì)

比活性（Specific Activity）：≥0.8Umg (+37°C, casein as substrate, pH 7.5)

單位定義（Unit Definition）：在溫度37℃、pH值為7.5的條件下，每分鐘水解酪蛋白釋放出相當于1μM(181μg)酪氨酸的福林陽性氨基酸和肽所需要的酶量，即為一個蛋白酶活性單位，以U表示。

最佳pH（pH Optimum）：6.0-8.5

抑制劑（Inhibitors）：EDTA, EGTA, Hg2+, 其他金屬離子。血清不會抑制dispase活性。

激活劑（Activator）：Ca2+，Mg2+，Mn2+，F(xiàn)e2+，F(xiàn)e3+，Al3+。最佳的Ca2+濃度為2mM。本酶制品已含足量的Ca2+使其處于最佳活性。

母液及工作液配制

1.用Hepe緩沖鹽溶液（50mM HepesKOH pH7.4, 150mM NaCl）溶解適量本品凍干粉，配制成10mgml的儲存液，用0.22μM濾膜過濾除菌。

2.使用時用適當細胞培養(yǎng)液將上述儲存液稀釋到工作液濃度即可，用于細胞分離時其常用工作濃度為0.6-2.4Uml?！咀ⅰ浚翰煌扑]使用高于2.4Uml的工作濃度。

使用方法

A.組織的解離

1）用無菌的小刀或者剪刀將組織剪成合適大小的組織塊；

2）用無菌PBS清洗組織塊；

3）向上述組織塊中加入Dispase II溶液（工作濃度為0.6-2.4Uml），并確保組織塊全部浸沒于Dispase 溶液中。

4）37℃孵育，孵育過程緩慢攪拌直至組織塊全部解離。【注】：若第一次使用該酶，可通過細胞計數(shù)來確定需要的總孵育時間。一般對于較難解離組織，1h即可達到分離目的，但更長時間（如數(shù)小時）的孵育也不會明顯影響細胞活性。

5）如有需要，可將上述消化產(chǎn)物通過無菌不銹鋼網(wǎng)篩過濾，以分開單細胞與殘留的組織塊?；蛘叽髩K組織沉淀后輕輕倒出上層細胞，若是需要，換用新鮮dispase溶液以進一步解離殘留組織。

6）離心沉淀細胞，倒掉酶溶液；

7）用培養(yǎng)基重懸細胞沉淀，并于常規(guī)條件下培養(yǎng)細胞。

B. 細胞傳代

1）利用Dispase 溶液（37℃預熱）浸沒細胞，于37℃孵育5min；

2）吸除上述溶液，繼續(xù)于37℃孵育10min；

3）顯微鏡下觀察細胞分離情況，如需要，可進一步孵育15min；

4）利用細胞培養(yǎng)基懸浮細胞，輕輕旋轉(zhuǎn)使得細胞沉淀并用培養(yǎng)基清洗細胞；

5）換用新鮮細胞培養(yǎng)液重懸細胞，并按常規(guī)方法進行細胞鋪板。

運輸和保存方法

冰袋運輸。

凍干粉4℃保存。儲存液于4℃可穩(wěn)定保存2周，若長期保存，請分裝后于-20℃凍存。避免反復凍融。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

Dispase 是Godo shuseiCo,Ltd的注冊商標。