myPOLS Biotec正在開發(fā)新一代的DNA聚合酶

       myPOLS Biotec是一家來自康斯坦茨大學(xué)的生物技術(shù)公司，來自Andreas Marx教授的研究小組。憑借我們在高通量DNA聚合酶設(shè)計(jì)方面的專業(yè)知識，我們?yōu)槟膽?yīng)用定制酶。

       研發(fā)活動(dòng)包括：

       改進(jìn)的DNA聚合酶用于SNP檢測和甲基化特異性PCR。

       病原體檢測分析，例如用于流感和諾如病毒診斷。

       具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的熱穩(wěn)定DNA聚合酶。

       抑制劑抗性聚合酶，用于從樣品中直接PCR，如全血，唾液，細(xì)菌，細(xì)胞 - 顆粒，植物等。

Isotherm2G DNA聚合酶

myPOLS Biotec正在開發(fā)新一代的DNA聚合酶

用于和可靠的應(yīng)用，例如個(gè)性化醫(yī)療，病原體檢測，DNA和RNA診斷，法醫(yī)學(xué)等等。

Isotherm2G DNA聚合酶

       是一種嗜溫性DNA聚合酶，非常適合等溫?cái)U(kuò)增。它可以從具有高鏈置換活性的DNA和RNA模板合成DNA。Isotherm2G已被突變，以提高反轉(zhuǎn)錄活性。在55-70°C之間活躍。Isotherm2G DNA聚合酶是等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的優(yōu)先選擇，如環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增（LAMP），鏈置換擴(kuò)增（SDA），滾環(huán)擴(kuò)增（RCA），分枝擴(kuò)增（RAM），基因組擴(kuò)增等。Isotherm2G DNA聚合酶以8 U / μl含甘油溶液的形式提供。它與足夠量的10x反應(yīng)緩沖液一起使用，該緩沖液已針對等溫?cái)U(kuò)增進(jìn)行了優(yōu)化。緩沖液中含3.25 mM鎂離子，終濃度為1x。鎂，引物和dNTPs的宜濃度在很大程度上取決于所應(yīng)用的應(yīng)用，應(yīng)該對其進(jìn)行優(yōu)化。

Volcano2G DNA聚合酶

       Volcano 2G是原始Volcano DNA聚合酶的高級版本，具有進(jìn)一步改善的逆轉(zhuǎn)錄活性。該酶是一種經(jīng)過工程改造的，極耐熱的逆轉(zhuǎn)錄酶和組合的DNA聚合酶，可通過定向的人工進(jìn)化獲得。Volcano2G DNA聚合酶可直接從RNA模板（無需等溫逆轉(zhuǎn)錄步驟）直接促進(jìn)“零步驟” RT-PCR，因?yàn)槟孓D(zhuǎn)錄與循環(huán)PCR延伸步驟中的DNA擴(kuò)增同時(shí)進(jìn)行。這也允許在高溫下進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，從而將在高溫下融化的RNA中強(qiáng)大的二級結(jié)構(gòu)所遇到的問題降至低。 

       Volcano2G DNA聚合酶包含熱啟動(dòng)劑配制的，具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的工程穩(wěn)定的熱穩(wěn)定DNA聚合酶和穩(wěn)健的Taq DNA聚合酶的酶混合物。基于適體的熱啟動(dòng)劑設(shè)計(jì)用于在低溫下（例如，在移取反應(yīng)混合物時(shí)）阻斷非特異性DNA聚合酶活性，但會(huì)在高于50-55°C的溫度下分解，從而釋放出現(xiàn)已完全活化的DNA聚合酶。

       Volcano2G DNA聚酶作為5 U / μl甘油庫存與適當(dāng)?shù)?span>5x Volcano反應(yīng)緩沖液一起運(yùn)輸，該緩沖液針對60-300 bp的擴(kuò)增子進(jìn)行了優(yōu)化。Volcano2G逆轉(zhuǎn)錄酶可以可靠地從≥1 ng的總RNA輸入中檢測RNA靶標(biāo)。它不需要Mn 2+即可  獲得宜活性。但是，可以通過向反應(yīng)中添加Mn 2+來進(jìn)一步優(yōu)化某些檢測方法（建議范圍是0.5-1 mM，未提供Mn 2+）。

       RT-PCR活性：已對 Volcano3G RT-PCR Mix進(jìn)行了成功的RT-PCR性能測試。在實(shí)時(shí)PCR循環(huán)儀中從人總RNA提取物中擴(kuò)增出151 bp片段（HPRT1 mRNA），并可視化為單個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物。