細(xì)胞分選常見疑問？？

問題一

為什么建議磁珠分選而不是流式分選？

1)磁珠分選需要的設(shè)備簡單，而流式分選需要配備分選型流式細(xì)胞儀，價格較為昂貴，而且流式分選對于操作員的技術(shù)要求很高，需要專門的培訓(xùn)并有一定的經(jīng)驗后才能很好地完成流式分選；

2)磁珠分選所需要的時間遠(yuǎn)小于流式分選所需要的時間；

3)磁珠分選對于目的細(xì)胞的刺激比流式分選要小，流式分選過程中需要對目的細(xì)胞所在的液滴通電，并且需要經(jīng)過一個強(qiáng)電場的區(qū)域，對目的細(xì)胞的刺激相對較大；磁珠分選只是讓細(xì)胞處于一個低磁場中，基本可以忽略對細(xì)胞的影響，從保持細(xì)胞活力的方面考慮，磁珠分選要優(yōu)于流式分選。

因此，如果磁珠分選可以滿足實驗需求時，應(yīng)盡量選擇磁珠分選的方法。

問題二

磁珠分選為什么要求細(xì)胞活性越高越好？

1)死細(xì)胞分泌DNA，DNA有粘性，會將磁珠標(biāo)記細(xì)胞和非標(biāo)記細(xì)胞粘在一起，如果是陽選會影響純度，如果是陰選會影響得率。

2)細(xì)胞活性低時可能會影響抗原抗體的結(jié)合效率。

問題三

磁珠分選buffer是什么？

autoMACS running buffer（自己配制：pH7.2 PBS，0.5％BSA、2mM EDTA，如需無菌，建議購買商品化buffer或紫外線照射，不建議高溫高壓滅菌）。

問題四

如果想分選的細(xì)胞有多個陽性marker怎么辦？

可以選擇磁珠分選陰選+陽選的方法，eg.分選小鼠脾臟naive CD4+T可以先用陰選的方法分到CD4+T細(xì)胞再用CD62L磁珠陽性分選；也可以用磁珠+流式的方法。

問題五

分選柱可以二次使用嗎？

不建議，主要是分選柱內(nèi)填充的鐵珠在使用后易生銹。

問題六

 分選柱應(yīng)如何選擇？

不同的試劑盒對于MS/LS/LD柱的最大細(xì)胞上樣量和最大磁性細(xì)胞吸附量是不同的，建議一定要參考說明書；

此外，如分選的目的細(xì)胞較大（eg.巨核細(xì)胞或fibroblast），可考慮采用large cell colums。