試劑盒組成：

LPS背景描述：

脂多糖 (LPS）是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜的主要成分，結(jié)構(gòu)很復(fù)雜、熱穩(wěn)定性極高(在250°C下干熱滅菌2h才完全滅活）。受LPS發(fā)現(xiàn)的歷史原因，如今LPS的概念幾乎等同于內(nèi)毒素 (endotoxin)。LPS由多糖鏈和脂質(zhì)A組成，不同細(xì)菌間的多糖鏈?zhǔn)歉叨茸兓模瑳Q定細(xì)菌的血清型;而脂質(zhì)A主要影響LPS的毒性作用。LPS可以引起免疫刺激的級(jí)聯(lián)反應(yīng)和機(jī)體的毒性病理生理活動(dòng)，包括釋放內(nèi)毒素引起感染性休克從而導(dǎo)致未梢血管虛脫。臨床常通過(guò)檢測(cè)LPS的存在來(lái)診斷腦膜炎。

正是LPS與機(jī)體免疫機(jī)能的密切關(guān)系，生命科學(xué)研究常常提取LPS進(jìn)行相關(guān)的研究，如闡明LPS的結(jié)構(gòu)，代謝，免疫學(xué)，生理學(xué)，毒性，生物合成途徑;誘導(dǎo)生長(zhǎng)促進(jìn)因子如白介素的合成與分泌；誘導(dǎo)疾病研究的動(dòng)物模型如炎癥反應(yīng)，急性肺損傷，

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

最常用的LPS提取方法仍然是Westphal,0. (1965)使用的熱酚-水法 (hot phenol-water method），主要優(yōu)勢(shì)在于高產(chǎn)量，但是提取步驟繁瑣，費(fèi)時(shí)，以及常受蛋白質(zhì)和核酸的污染，純度低等缺點(diǎn)也常困擾科研工作者。

iNtRON提供的LPS提取試劑盒是市場(chǎng)上的第一個(gè)商品化的產(chǎn)品，排除傳統(tǒng)熱酚-水法的缺陷，使得科研工作者能夠快速方便的從細(xì)菌中提取LPS。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

1、適用性廣，能從所有G-菌中提取LPS；

2、操作時(shí)間短（包括裂解在內(nèi)，60min內(nèi)即可完成）；操作簡(jiǎn)單方便：

3、少量細(xì)菌即可獲得足夠的LPS; LPS產(chǎn)量與細(xì)菌培養(yǎng)物成正比，一般使用3~5ml培養(yǎng)物L(fēng)PS產(chǎn)量最高；細(xì)菌最佳培養(yǎng)體積1~2ml (OD600=0.8-1.2)

4、LPS產(chǎn)率高，且重復(fù)性好；

5、提取LPS下游應(yīng)用廣，包括直接用于免疫刺激；

操作步驟：

1）室溫離心收獲細(xì)菌細(xì)胞，13, 000rpm, 30sec。

2）加入1ml裂解緩沖液 (Lysis Buffer)，劇烈渦旋混勻。

3）加入200ul氯仿，劇烈渦旋混勻10-20 sec，室溫孵育5min。

4） 4°C，13,000rpm離心10min，轉(zhuǎn)移400u1上清到新1.5ml離心管中。

5)加入800p1純化裂解液 (Purification Buffer)．并混勻。-20°C孵育10min。

6) 4°C， 13,000rpm離心15min。

7）用1ml 70%EtOH洗滌LPS顆粒，并完全干燥。

8）在LPS中加入70ul Tris-HCL (10mM, pH8.0） ，并超聲。

脂多糖（LPS) 是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜的主要成分，結(jié)構(gòu)復(fù)雜、對(duì)熱穩(wěn)定；一些脂多糖是引起疾病的內(nèi)毒素，它也是血清型分類(lèi)的重要指標(biāo)。常見(jiàn)的熱酚或油/氯仿/苯酚的脂多糖純化方法既復(fù)雜又費(fèi)時(shí)。 LPS提取試劑盒提供了一個(gè)更少步驟、更短時(shí)間就能獲得更高產(chǎn)量的脂多糖提取新方法，采用強(qiáng)大的水/酚/氯仿萃取技術(shù)，即使細(xì)菌體積＜5ml也能提取出脂多糖。