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HOLMES ssRNA reporter (FAM)
| 貨號 | 31111 | 售價 | 1000 |
| 規(guī)格 | 1 OD | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
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產(chǎn)品簡介
HOLMES ssRNA reporter (FAM)是單鏈RNA寡核苷酸探針，5′端標記FAM熒光報告基團（Reporter），3′端標記熒光淬滅基團(Quencher)。當HOLMES ssRNA reporter探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號會被淬滅基團淬滅。而當HOLMES ssRNA reporter探針被切斷后，5'端的FAM熒光報告基團和淬滅基團分離，從而發(fā)出可被檢測的熒光信號。常見的Cas13酶在與guide RNA、target RNA組成三元復合物后，都會被激發(fā)出針對ssRNA的反式剪切活性(或稱為旁路切割活性)，將HOLMES ssRNA reporter探針切碎，并發(fā)出熒光信號。
HOLMES ssRNA reporter (FAM)探針經(jīng)過特別的序列優(yōu)化，對Cas13反式切割活性高度敏感，可作為Cas13家族蛋白反式切割反應的報告探針，廣泛用于CRISPR診斷反應體系以便對靶標核酸進行快速檢測。
實驗流程
1.反式剪切實驗體系
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組分 |
體積 |
終濃度 |
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10 × HOLMES Buffer 1 |
2 μL |
1 × |
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10 μM Cas13 Nuclease |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM guide RNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM Target DNA |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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10 μM HOLMES ssDNA reporter |
0.05~0.5 μL |
25~250 nM |
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Nuclease-free water |
Up to 20 μL |
◆ 反式剪切體系中各組分的用量可以根據(jù)不同的實驗目的進行調(diào)整，用量較少時可先將各組分稀釋后加入體系；
◆ 建議使用低吸附的離心管、吸頭等耗材；
◆ 反式剪切體系中探針的用量和預期反應到達平臺期的時間可參考各批號Cas酶transU的具體數(shù)值，詳見本公司提供的COA檢測報告。
實時熒光定量PCR儀檢測熒光信號，每30 sec采集一次熒光信號，反應溫度根據(jù)不同的Cas13酶最適溫度進行設(shè)定。
產(chǎn)品組分
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組分 |
31111 |
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1 OD |
HOLMES ssDNA reporter (FAM) a
a.HOLMES ssRNA reporter (FAM)總量為1 OD (約為8.45 nmol)，為干粉狀態(tài)。使用前請先短暫離心，然后加入84.5 μL DNase/RNase-Free Water溶解，得到濃度為100 μM的貯存液，在無反復凍融的條件下可于-80℃避光保存6～12個月。使用前再將貯存液用DNase/RNase-Free Water稀釋成10 μM的工作液，按下表推薦的濃度加入CRISPR剪切反應體系中。剩余工作液可于-20℃避光保存，3～6個月內(nèi)使用。
保存條件
-80℃避光儲存；≦4℃運輸。