產(chǎn)品描述

    LbCas12a (又名Cpf1)核酸酶來源于Lachnospiraceae bacterium ND2006菌株。LbCas12a是由crRNA介導的DNA核酸內(nèi)切酶，在靶標雙鏈DNA存在PAM (TTN) 序列的情況下，特異地剪切靶標雙鏈DNA，使DNA雙鏈斷裂并生成粘性末端。而LbCas12a特異地剪切單鏈DNA靶標不依賴PAM序列。此外，雙鏈或單鏈DNA靶標均能激活LbCas12a的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附屬剪切活性)，即當LbCas12a酶與crRNA、靶標DNA結(jié)合形成三元復合物后，便會被激活針對非特異序列ssDNA的反式剪切活性，將體系中的任意序列ssDNA切碎。因此，LbCas12a酶不僅可用于體外dsDNA的特異剪切，也可用于靶標核酸的快速檢測，詳見本公司開發(fā)的HOLMES[1]核酸快檢技術(shù)。

本產(chǎn)品將無甘油LbCas12a核酸酶凍干，可用于常溫運輸及保存，使用配套的凍干Cas酶復溶液復溶后，具有與本公司非凍干型LbCas12a (Cpf1) Nuclease（#32108）同等的反應(yīng)活性。本產(chǎn)品包括可用于單個反應(yīng)的酶凍干粉及凍干球等多種凍干形態(tài)，滿足不同下游反應(yīng)體系構(gòu)建的需求。

產(chǎn)品組分

· 單個反應(yīng)的凍干粉中LbCas12a含量為5 pmol，建議用于20 μL CRISPR反應(yīng)體系；

保存條件

        本產(chǎn)品常溫保存及運輸；復溶后于-20℃儲存，避免反復凍融。

實驗流程

1.冰上制備如下除Cas酶外的CRISPR反式剪切反應(yīng)體系 mix：

2.將上述 mix 20 μL混勻后加入單個反應(yīng)體系的凍干粉，使之溶解。

3.立即放入實時熒光定量 PCR儀檢測熒光信號，37℃反應(yīng)，每 30 sec采集一次熒光信號。

實驗結(jié)果

注意事項

2. 為防止 RNase 污染，請保持實驗區(qū)干凈整潔，操作時需穿戴干凈的手套、口罩，實驗所用槍頭、離心管等耗材均為 RNase-free。

3. 本產(chǎn)品僅包含 Cas 酶，CRISPR 反應(yīng)體系中所需的 Target DNA 和 crRNA 需要自己制備，10 × HOLMES Buffer 1 (#32005)和 10 μM HOLMES ssDNA Reporter (#31101)推薦從 TOLOBIO 選購。

4. 復溶后的 LbCas12a 需在冰上配制反應(yīng)體系，且使用后立即將酶置于-20℃保存 (-20℃可保存一個月)。

5. 本產(chǎn)品僅供科研使用。