產(chǎn)品描述

        AapCas12b 核酸酶(又名 C2c1)是由 tracrRNA-crRNA(或 sgRNA)介導的 DNA 核酸內(nèi)切酶，在靶標雙鏈 DNA 存在 PAM (TTN) 序列的情況下，特異地剪切靶標雙鏈 DNA，使 DNA 雙鏈斷裂并生成粘性末端。而 AapCas12b 特異地剪切單鏈 DNA 靶標不依賴 PAM 序列。此外，雙鏈或單鏈 DNA 靶標均能激活 AapCas12b 的反式剪切活性(即旁路剪切活性/附屬剪切活性)，即當 AapCas12b 酶與 sgRNA、靶標 DNA 結(jié)合形成三元 復合物后，便會被激活針對非特異序列 ssDNA 的反式剪切活性，將體系中的任意序列 ssDNA 切碎。 AapCas12b 來源于嗜酸耐熱菌 Alicyclobacillus acidiphilus，最佳剪切反應溫度為 60℃，因此更適用于與 LAMP 聯(lián)用，開發(fā)“一步法”恒溫擴增/CRISPR-Cas 檢測體系。

本產(chǎn)品將無甘油 AapCas12b 核酸酶凍干，可用于常溫運輸及保存，使用配套的凍干 Cas 酶復溶液復溶 后，具有與本公司非凍干型 AapCas12b (C2c1) Nuclease（#32118）同等的反應活性。本產(chǎn)品包括可用于單 個反應的酶凍干粉及凍干球等多種凍干形態(tài)，滿足不同下游反應體系構(gòu)建的需求。

產(chǎn)品組分

· 單個反應的凍干粉中AapCas12b含量為5 pmol，建議用于20 μL CRISPR反應體系；

保存條件

       本產(chǎn)品常溫保存及運輸；復溶后于-20℃儲存，避免反復凍融。

實驗流程

1.冰上制備如下除Cas酶外的CRISPR反式剪切反應體系 mix：

2.將上述 mix 20 μL混勻后加入單個反應體系的凍干粉，使之溶解。

3.立即放入實時熒光定量 PCR儀檢測熒光信號，60℃反應，每 30 sec采集一次熒光信號。

實驗結(jié)果

注意事項

2. 為防止 RNase 污染，請保持實驗區(qū)干凈整潔，操作時需穿戴干凈的手套、口罩，實驗所用槍頭、離心管等耗材均為 RNase-free。

3. 本產(chǎn)品僅包含 Cas 酶，CRISPR 反應體系中所需的 Target DNA 和 crRNA 需要自己制備，10 × HOLMES Buffer 1 (#32005)和 10 μM HOLMES ssDNA Reporter (#31101)推薦從 TOLOBIO 選購。

4. 復溶后的 AapCas12b 需在冰上配制反應體系，且使用后立即將酶置于-20℃保存 (-20℃可保存一個月)。

5. 本產(chǎn)品僅供科研使用。