測定意義：

維生素E（Vitamin E）是一種脂溶性維生素，其水解產(chǎn)物為生育酚，是生物體中最主要的抗氧化劑之一，能阻止不飽和脂肪酸收到過氧化作用的損傷，維持不飽和脂肪酸細(xì)胞膜的完整性和正常功能，具有延緩衰老、預(yù)防溶血性貧血作用，在醫(yī)藥、化妝品、保健品、食品行業(yè)具有較高的應(yīng)用價(jià)值。

測定原理：

VE還原Fe³⁺為Fe²⁺，Fe²⁺與1,10-菲羅啉產(chǎn)生有色絡(luò)合物，在530nm有特征吸收峰。

組成：

試劑三：粉劑×1 瓶，-20 ℃保存，用時(shí)加入 4ml 蒸餾水，混勻，用不完的試劑 4℃保存一周；

試劑四：粉劑×1 瓶，4 ℃保存，用時(shí)加入 4ml 蒸餾水，混勻，用不完的試劑 4℃保存一周；

自備儀器和用品：

天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 ml玻璃比色皿、漩渦震蕩儀。

樣本處理：

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.2g，加入1ml提取液）加入提取液，充分勻漿后用提取液定至2ml，在漩渦混勻儀上震蕩5min，于25℃，5000g離心10min，取上層測定。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議1000萬細(xì)胞加入2ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；在漩渦混勻儀上震蕩5min，于25℃，5000g離心10min，取上層測定。

3. 血清：取0.1ml，加1.9ml提取液，漩渦儀混勻上震蕩5min，于25℃，5000g離心10min，取上層測定。                   

測定操作：

計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.22x + 0.0065， R² = 0.9978

1. 按照蛋白含量計(jì)算

VE含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷（V樣×Cpr）

                    = 9.09×（△A -0.0065）÷ Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

VE含量（μg/g）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷（V樣×W÷V樣總）

                    = 18.18×（△A -0.0065）÷ W

3. 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

VE含量（μg/10⁴ cell）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）

                    = 18.18×（△A -0.0065）÷ 細(xì)胞數(shù)量

4. 按照液體體積計(jì)算

VE含量（μg/ml）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V反總÷V樣×20

                = 181.82×（△A -0.0065）

V反總：反應(yīng)總體積，1ml；：V樣：加入樣本體積，0.5ml；V樣總：加入提取液體積，2ml； Cpr：蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)：

1. 若反應(yīng)體系產(chǎn)生沉淀，需要將樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂?，并在?jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2. 最低檢出限為1μg/g。