產(chǎn)品信息

        沃博生物的鼠尾I型膠原蛋白（Collagenfromrattail,TypeI）系采用Birkedal-Hansen方法在無(wú)菌下制備，純度達(dá)到95%以上，可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被，特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)；也可用于制備三維膠原凝膠，使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長(zhǎng)。

產(chǎn)品性質(zhì)

中文別名：鼠尾膠原蛋白Ⅰ型

英文別名：Rat tail tendon collagen type

外觀（Appearance）：白色粉末

溶解性（Solubility）：溶解于0.006mol/L乙酸 5mg/ml

優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)

無(wú)塵車間內(nèi)生產(chǎn)，保證潔凈度

可用于包被細(xì)胞培養(yǎng)器皿(單分子層包被)

也可形成具有一定強(qiáng)度的三維膠用于細(xì)胞的三維空間培養(yǎng)

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)測(cè)試(包括三維膠內(nèi)的細(xì)胞培養(yǎng))

電泳結(jié)果和 Sigma 的同類產(chǎn)品無(wú)顯著區(qū)別

產(chǎn)品為無(wú)菌的溶液，省去從干粉配制的麻煩

圖示案例

圖1：沃博生物的鼠尾膠原蛋白包被的

培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)的 PC-12 細(xì)胞

圖2：沃博生物的鼠尾膠原蛋白三維膠中

生長(zhǎng)的 NIH-3T3 細(xì)胞（接種后 5天）

圖3：Sigma鼠尾膠原蛋白(貨號(hào)： C7661)

SDS-PAGE 電泳對(duì)比。

A: Sigma B：warbio

實(shí)驗(yàn)步驟參考

1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被 推薦濃度： 1-5ug/cm2

以包被濃度為 2 ug/cm2 為例

用無(wú)菌0.006mol/L(0.36g/L) 乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/ml。按表 (一)體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中

確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面，開(kāi)蓋在超凈臺(tái)上過(guò)夜晾干。 也可以在室溫放置 1小時(shí)后，用PBS洗3-4次后直接使用。

按表 (一)體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中：

包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3個(gè)月以上的時(shí)間。

2、三維膠原的制備

沃博生物的鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH 7左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。沃博膠原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成膠過(guò)程中需要加入0.06X 體積的 0.1mol/L NaOH 來(lái)中和。

需要的溶液 ( 均需要 無(wú)菌 、 預(yù)冷 ): 10xPBS( 可含10 mg/L的酚紅用于 pH 指示 )或 10x 培養(yǎng)液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸(一般不用), 雙蒸水

A．不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul沃博生物鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10xPBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。

B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞，并放置于冰浴中。將200ul沃博生物鼠尾膠原蛋白I型 (5mg/ml)加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23ul 10xPBS或10x培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注：鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠，在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。

1 、 Birkedal-Hansen, H. 1987. Catabolism and turnover of collagens: Collagenases. Methods Enzymol. 144 : 140-171.

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注意事項(xiàng)

1、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

2、鼠尾膠原蛋白I型在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠，在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。

3 、整個(gè)操作請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌環(huán)境下無(wú)菌操作，避免污染以影響細(xì)胞生長(zhǎng)。

運(yùn)輸與保存方法

冰袋運(yùn)輸。4℃保存，有效期1年。不可凍存。