REVIEW

近年來(lái)，SARS-CoV-2病毒全球大流行，給病毒診斷帶來(lái)了巨大的挑戰(zhàn)。以往的核酸檢測(cè)方法因復(fù)雜的樣品處理和昂貴的儀器設(shè)備，且檢測(cè)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)（約2小時(shí)），降低病毒檢測(cè)的速度。因此，市場(chǎng)迫切需要核酸分子檢測(cè)從標(biāo)準(zhǔn)的核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室向快速POCT轉(zhuǎn)移。安普未來(lái)的MIRA技術(shù)憑借著快速、簡(jiǎn)便、靈敏、便攜的優(yōu)勢(shì)，為推動(dòng)該項(xiàng)需求的實(shí)現(xiàn)做出顯著貢獻(xiàn)。

將核酸擴(kuò)增與CRISPR結(jié)合，是當(dāng)下一種新型核酸檢測(cè)方法。已有多位科研老師將MIRA技術(shù)與CRISPR技術(shù)做結(jié)合，在檢測(cè)SARS-CoV-2病毒時(shí)，顯示出優(yōu)異的靈敏度、特異性，尤其在檢測(cè)的高效和便捷方面，顯著優(yōu)于其他技術(shù)，為實(shí)現(xiàn)快速POCT提供了解決方案！

MIRA技術(shù)結(jié)合

CRISPR Cas12、Cas13a蛋白

武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)研究院/教育部免疫與代謝前沿科學(xué)中心的殷昊教授和張楹教授課題組，在《Nature Biomedical Engineering》期刊上發(fā)表題為“Fast and sensitive detection of SARS-CoV-2 RNA using suboptimal protospacer adjacent motifs for Cas12a”的文章，影響因子29.234。

實(shí)驗(yàn)成功開(kāi)發(fā)了一種基于恒溫?cái)U(kuò)增（安普未來(lái)恒溫?cái)U(kuò)增試劑）和CRISPR相結(jié)合一步法熒光檢測(cè)（SARS-CoV-2）的方法，檢測(cè)時(shí)間小于20 分鐘，靈敏度與RT-qPCR一致且特異性強(qiáng)。該方法快速、靈敏和便于操作。

（使用安普未來(lái)試劑來(lái)檢測(cè)SARS-CoV-2的方法流程圖）

（熒光信號(hào)在6-10 min時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)，在9-15min時(shí)逐漸達(dá)到平臺(tái)期）

實(shí)驗(yàn)同步還使用了美國(guó)雅培的TwistDx恒溫?cái)U(kuò)增試劑做對(duì)比。結(jié)果顯示，安普未來(lái)的MIRA試劑和雅培的靈敏度一致，檢測(cè)限為24拷貝/反應(yīng)。但雅培與Cas12a、Cas13a的緩沖環(huán)境并不完全兼容。安普未來(lái)的MIRA試劑在保證準(zhǔn)確性、靈敏度的同時(shí)，穩(wěn)定性和兼容性更勝一籌！

（文章引用：https://www.nature.com/articles/s41551-022-00861-x）

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MIRA技術(shù)結(jié)合

CRISPR Cas13蛋白

中國(guó)人民解放軍疾病預(yù)防控制中心宋宏彬主任的課題組在《JOURNAL OF MEDICAL VIROLOGY》發(fā)表了題為“Highly sensitive and rapid detection of SARS-CoV-2 via a portable CRISPR-Cas13a-based lateral flow assay”的文章，影響因子20.693。

實(shí)驗(yàn)采用兩步法的操作方法，研究人員針對(duì)SARS-CoV-2 N基因序列設(shè)計(jì)篩選了MIRA擴(kuò)增的引物，使用安普未來(lái)試劑，參考說(shuō)明書(shū)進(jìn)行體系配制，在42°C條件下擴(kuò)增30 min。MIRA完成擴(kuò)增后結(jié)合CRISPR技術(shù)分別進(jìn)行了熒光法的檢測(cè)和試紙條的檢測(cè)。

（使用安普未來(lái)試劑來(lái)檢測(cè)SARS-CoV-2的熒光或免疫層析法流程圖）

（結(jié)果顯示檢測(cè)限為0.25拷貝/μl）

實(shí)驗(yàn)中，熒光和免疫層析檢測(cè)SARS-CoV-2的檢測(cè)限均為0.25拷貝/μl，即2.5拷貝/反應(yīng)，MIRA技術(shù)的靈敏度優(yōu)于市場(chǎng)上常規(guī)擴(kuò)增試劑，得到了劉洪波老師等的高度認(rèn)可。

該實(shí)驗(yàn)將MIRA與CRISPR結(jié)合，提供了一個(gè)可視化檢測(cè)方法，且反應(yīng)溫度為37-42°C，控溫要求低，節(jié)省了昂貴儀器的成本，大大提高現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的可能性。

（文章引用：https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/jmv.28096）

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MIRA技術(shù)結(jié)合

CRISPR Cas12a蛋白

亞能生物湯光輝博士的課題組在《PLOS Biology》期刊上發(fā)表了題為“Rapid detection of SARS-CoV-2 with CRISPR-Cas12a.”的文章，影響因子9.593。文中介紹了一種基于CRISPR Cas12a的檢測(cè)SARS-CoV-2的方法。

實(shí)驗(yàn)采用兩步法的操作方法，首先使用安普未來(lái)試劑在42?C的條件下擴(kuò)增15-20分鐘，再使用CRISPR Cas12蛋白在37?C條件下反應(yīng)15-20分鐘。該實(shí)驗(yàn)最快可以在35分鐘內(nèi)完成，并在紫外光成像儀或橫向流動(dòng)帶下進(jìn)行可視化的結(jié)果判讀。

（使用安普未來(lái)試劑來(lái)檢測(cè)SARS-CoV-2的熒光閱讀器或視覺(jué)檢測(cè)方法流程圖）

（凝膠成像系統(tǒng)檢測(cè)信號(hào)&橫向流動(dòng)試紙條顯色）

該實(shí)驗(yàn)的分析靈敏度為1拷貝/μL，即達(dá)到1拷貝/反應(yīng)，且可以通過(guò)肉眼觀察結(jié)果。這種準(zhǔn)確、便攜、快速的檢測(cè)方法在非專(zhuān)業(yè)分子實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中對(duì)檢測(cè)COVID-19方面具有巨大的市場(chǎng)前景及發(fā)展?jié)摿Α?/span>

（文章引用：https://journals.plos.org/plosbiology/article?id=10.1371/journal.pbio.3000978）

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MIRA技術(shù)

安普未來(lái)MIRA技術(shù)的試劑產(chǎn)品已走入不少科研單位實(shí)驗(yàn)室和企業(yè)生產(chǎn)車(chē)間，在保證基礎(chǔ)的靈敏度、特異性的前提下，不受設(shè)備、場(chǎng)地的局限，快速高效地完成檢測(cè)，很好地解決了POCT的問(wèn)題，具有更加廣闊的市場(chǎng)前景！

文章轉(zhuǎn)載：https://mp.weixin.qq.com/s/Ysk1B_x2ei_vVDw8ivPr7Q

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