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PE和PE串聯(lián)染料在流式抗體中為什么常見?

PE(藻紅蛋白,Phycoerythrin)是從紅藻中分離出來的240 kDa 藻膽蛋白。它發(fā)出強烈的黃橙色熒光(比熒光素亮約 25 倍),摩爾消光系數(shù)為 1,960,000 cm -1 M -1,熒光量子產(chǎn)率為 0.84。天然狀態(tài)下的 PE 熒光光譜具有三個吸光度峰,一個主吸光度峰位于 565 nm,兩個次級吸光度峰位于 496 nm 545 nm,一個發(fā)射峰位于 574 nm。這三個吸光度峰提高了與配備藍色 (488 nm)、綠色 (532 nm) 和黃色激光 (561-568 nm) 的成像儀器的兼容性。

在使用PE之前,必須先將其與具有生物特異性的分子(例如抗體、鏈霉親和素或膜聯(lián)蛋白V)結(jié)合。PEPE串聯(lián)結(jié)合物通常用于流式細胞術(shù)、微陣列和 ELISA,由于其快速光漂白特性,在免疫熒光顯微鏡中的用途有限。

 

1.PE的熒光光譜

 

R-PER-藻紅蛋白,R-Phycoerythrin是一種特殊類型的藻紅蛋白,其主要吸收峰在 565 nm,次要吸收峰在496545 nm。不同物種的 R-PE 中次要吸收峰的相對突出程度存在很大差異。PE 有三種亞基:α20KDa)、β20KDa)和γ30KDa)。R-PEα亞基僅包含藻紅蛋白 (PEB) 發(fā)色團,而βγ亞基則同時包含PEB和藻尿蛋白 (PUB)。不同物種的 PE 吸收光譜的變化反映了亞基的 PEB/PUB 比率的差異。R-PE和密切相關(guān)的B-PE 是熒光最強烈的藻膽蛋白,量子效率可能超過90%,并且其橙色熒光在任何中等濃度的溶液中都可以用肉眼輕易看到。