阿爾瑪藍(lán)（Alamar Blue）是一種細(xì)胞增殖檢測試劑，對各種人和哺乳動物細(xì)胞、細(xì)菌和真菌提供一種快速和敏感的細(xì)胞增殖和毒性檢測方法。

阿爾瑪藍(lán)（Alamar Blue）是一種基于刃天青（resazurin）的檢測試劑。刃天青作為一種一種氧化還原（REDOX）指示劑，根據(jù)細(xì)胞代謝還原情況發(fā)生顏色變化。氧化態(tài)的刃天青呈紫藍(lán)色且基本無熒光，其還原態(tài)產(chǎn)物試鹵靈（resorufin）轉(zhuǎn)變?yōu)榉奂t色且高度熒光，產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度與呼吸活細(xì)胞數(shù)量呈正比。通過檢測呼吸過程中氧化水平，阿爾瑪藍(lán)用作一種定量檢測細(xì)胞活力和毒性的直接指示劑。阿爾瑪藍(lán)的顏色變化可通過普通分光光度計檢測吸光度變化，檢測波長為570nm，參考波長為600nm；阿爾瑪藍(lán)的熒光變化可通過熒光光度計檢測，激發(fā)波長在530~560nm之間，發(fā)射波長為590nm。

檢測原理：（細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) Cell proliferation assay））

1.生長中細(xì)胞引起Alamar Blue的化學(xué)還原反應(yīng)；

2. 持續(xù)性細(xì)胞生長維持還原環(huán)境，使得Alamar Blue呈紅色，發(fā)強(qiáng)熒光；

3. 生長受抑制維持氧化環(huán)境，使得Alamar Blue呈藍(lán)色，無熒光；

4. 使用基于熒光或吸光值檢測的儀器收集數(shù)據(jù)；

5. 熒光檢測的激發(fā)波長為530~560nm之間，發(fā)射波長為590nm；

6. 吸光值檢測的波長為570nm，參考波長為600nm；

保存方法：

室溫12個月穩(wěn)定，2-8°C保存20個月穩(wěn)定；避光保存；

產(chǎn)品優(yōu)勢：

簡單：水溶性，只需添加和測量即可；

靈活：顯色和熒光檢測，懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞；

無毒：對細(xì)胞無毒，對使用者和環(huán)境也無毒；

可靠：大量引用用于細(xì)胞毒性和活力檢測；

規(guī)?；汉唵畏糯篌w系用于高通量分析

高靈敏：最低可檢測到50個細(xì)胞

穩(wěn)定高：獨(dú)特緩沖配方使其能用于長期研究；

經(jīng)濟(jì)：不需要細(xì)胞裂解，使細(xì)胞能繼續(xù)培養(yǎng)用于后續(xù)分析；操作時請注意避光。

注意事項(xiàng)

1. 還原態(tài)的Alamar Blue在水或水溶性緩沖液如PBS中很不穩(wěn)定，但在培養(yǎng)基內(nèi)非常穩(wěn)定。為了確定特定實(shí)驗(yàn)還原態(tài)Alamar Blue的吸光度/熒光值，需準(zhǔn)備100%還原態(tài)Alamar Blue試劑：將Alamar Blue與細(xì)胞培養(yǎng)基按照1:10的比例混合，高壓滅菌15min即可。

2. 適宜的細(xì)胞密度能夠增加檢測靈敏度。對于96孔板，建議每孔接種100μl細(xì)胞，細(xì)胞濃度范圍：貼壁細(xì)胞為100-10,000個/孔，懸浮細(xì)胞在2,000-50,000個/孔，以培養(yǎng)基為空白對照。對于384孔板，細(xì)胞濃度和接種量均減半。

3. 影響細(xì)胞對Alamar Blue反應(yīng)的兩大變量為孵育時間和鋪板密度，建議實(shí)驗(yàn)前需先摸索優(yōu)化這兩個因素。細(xì)胞密度過高或孵育時間過長都會導(dǎo)致繼發(fā)性還原反應(yīng)，紅色產(chǎn)物停止增加并開始衰減，導(dǎo)致吸光度/熒光水平明顯下跌并伴隨紅色消失。

4. 微生物污染會還原Alamar Blue。因此對被污染細(xì)胞使用Alamar Blue檢測會引起錯誤結(jié)果。

5. Alamar Blue可以用分光光度計或熒光計檢測，但熒光靈敏度高，實(shí)驗(yàn)誤差小，推薦熒光檢測。

6. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明

一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測定最佳孵育時間和細(xì)胞數(shù)量）

1. 每孔加入100微升細(xì)胞懸液（對數(shù)生長期細(xì)胞），對細(xì)胞計數(shù)。按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個細(xì)胞濃度梯度，每個濃度建議3-6個復(fù)孔。注：設(shè)置陰性對照：細(xì)胞培養(yǎng)基中不加入細(xì)胞；陽性對照：100微升100%還原型Alamar Blue（不含細(xì)胞）。

2. 每孔加入10微升Alamar Blue。陽性對照孔中加入10微升無菌的超純水。

3. 放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）一定時間。培養(yǎng)基的顏色由靛青藍(lán)開始變成粉紅色就可以進(jìn)入下一步。

4. 推薦用熒光分光光度計檢測，激發(fā)光波長在530-560 nm之間，發(fā)射光波長為590 nm。

5. 普通分光光度計在570 nm測定吸光度，參考波長600nm。也可用570/630 nm和540/600 nm替代。

6. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以細(xì)胞數(shù)量或孵育時間為橫坐標(biāo)（X軸），Alamar Blue還原率為縱坐標(biāo)（Y軸）。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出適合的細(xì)胞數(shù)量或孵育時間（使用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致）。

二、細(xì)胞毒性和細(xì)胞增殖檢測

1. 每孔加入100微升細(xì)胞懸液（對數(shù)生長期細(xì)胞），對細(xì)胞計數(shù)。建議細(xì)胞數(shù)量為104/mL，具體每孔需要的細(xì)胞數(shù)量，需根據(jù)細(xì)胞類型決定。

2. 細(xì)胞中加入待檢測藥物，為檢測藥物對細(xì)胞增殖的作用，請設(shè)置合適的對照組，包括刺激細(xì)胞和非刺激細(xì)胞。

3. 混勻，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育（37℃,5% CO2）一段時間。

4. 每孔加入10微升Alamar Blue。陽性對照孔中加入10微升無菌的超純水。

5. 放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育（37℃,5% CO2）4-8 h，最佳孵育時間取決于細(xì)胞類型。培養(yǎng)基的顏色由靛青藍(lán)開始變成粉紅色就可以進(jìn)入下一步。

6. 推薦用熒光分光光度計檢測，激發(fā)光波長在530-560 nm之間，發(fā)射光波長為590 nm。

7. 普通分光光度計在570nm測定吸光度，參考波長600 nm。也可用570/630 nm和540/600 nm替代。

活力計算                               

1.普通分光光度計檢測

Alamar Blue還原率（％）=[（E600×A570）-（E570×A600）]/[(E570′×C600)-E600′×C570] ×100

E570=氧化型Alamar Blue在570 nm波長的消光系數(shù)=80586；

E600=氧化型Alamar Blue在600 nm波長的消光系數(shù)=117216；

A570=檢測孔在570 nm波長的吸亮度；

A600=檢測孔在600 nm波長的吸亮度；

E570′=還原型Alamar Blue在570 nm波長的消光系數(shù)=155677；

E600′=還原型Alamar Blue在600 nm波長的消光系數(shù)=14652；

C570=陰性對照孔在570 nm波長的吸亮度（培養(yǎng)基，Alamar Blue，無細(xì)胞）；

C600=陰性對照孔在600 nm波長的吸亮度（培養(yǎng)基，Alamar Blue，無細(xì)胞）；

如果使用570/630 nm和540/600 nm作為替代，則：

E540=氧化型Alamar Blue在540 nm波長的消光系數(shù)=47619；

E630=氧化型Alamar Blue在630 nm波長的消光系數(shù)=34798；

E540′=還原型Alamar Blue在540 nm波長的消光系數(shù)=104395；

E630′=還原型Alamar Blue在630 nm波長的消光系數(shù)=5494；

2.熒光分光光度計檢測

Alamar Blue還原率（％）= （實(shí)驗(yàn)組F590-陰性對照組F590）/（100%還原型陽性對照F590-陰性對照組F590）×100

F590=590 nm波長熒光值

相關(guān)產(chǎn)品：