食源性病原微生物快速檢測(cè)技術(shù)是實(shí)現(xiàn)全產(chǎn)業(yè)鏈?zhǔn)称钒踩闹匾侄??；?/span>CRISPR-Cas系統(tǒng)的新一代分子檢測(cè)技術(shù)具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、快速的優(yōu)點(diǎn)。近日來自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所的龔建森博士團(tuán)隊(duì)聯(lián)合揚(yáng)州大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)和美國(guó)奧本大學(xué)的研究人員通過將LAMP等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)與CRISPR/Cas12b檢測(cè)系統(tǒng)相結(jié)合，成功構(gòu)建了適合腸炎沙門氏菌的一步法LAMP-CRISPR/Cas12b快檢技術(shù)體系。該研究創(chuàng)新性地實(shí)現(xiàn)在一管內(nèi)一步完成擴(kuò)增加酶切反應(yīng)，不僅突破了常規(guī)CRISPR檢測(cè)兩管開蓋或一管兩步的操作繁瑣性，而且可以有效規(guī)避交叉操作及氣溶膠污染對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。相關(guān)研究成果發(fā)表于Food Control（中科院1區(qū)，IF:6）的題為“Rapid and accurate detection of Salmonella enterica serovar Enteritidis using a one-step LAMP-CRISPR/Cas12b method”

檢測(cè)流程

從樣品中提取基因組DNA，直接加入預(yù)先配制工作溶液的反應(yīng)管中進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)存在目標(biāo)核酸序列時(shí)可采集到熒光信號(hào)，不存在目標(biāo)核酸序列時(shí)檢測(cè)不到顯著信號(hào)。

                                                         腸炎沙門氏菌LAMP-CRISPR/Cas12b檢測(cè)系統(tǒng)工作流程示意圖

研究成果

        腸炎沙門氏菌（S. Enteritidis）作為一種全球流行的食源性病原體構(gòu)成了重大威脅。及時(shí)的診斷方法是有效管理腸炎沙門氏菌感染的必要條件。為了快速、準(zhǔn)確、便捷地檢測(cè)腸炎沙門氏菌，研究人員建立了一步法LAMP-CRISPR/Cas12b檢測(cè)平臺(tái)，整個(gè)反應(yīng)只需要45分鐘，不需要專門的設(shè)備，具有100%的特異性，達(dá)到了每個(gè)反應(yīng)30個(gè)拷貝的檢測(cè)限。該檢測(cè)平臺(tái)對(duì)其他19種沙門氏菌血清型和9種非沙門氏菌致病菌具有100%的特異性，無交叉反應(yīng)。與傳統(tǒng)培養(yǎng)的方法進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)一步法LAMP-CRISPR/Cas12b平臺(tái)的腸炎沙門氏菌陽(yáng)性率為2.88%（6/208），其中雞肉為3.14%（4/127），鴨肉為4.44%（2/45），豬肉為0.0%（0/36），與傳統(tǒng)培養(yǎng)方法的一致性為100%。該研究成果表明一步LAMP-CRISPR/Cas12b平臺(tái)用于腸炎沙門氏菌檢測(cè)的簡(jiǎn)便性和準(zhǔn)確性，不僅為腸炎沙門氏菌的檢測(cè)提供了一種簡(jiǎn)單，快速且準(zhǔn)確的技術(shù)手段，而且為其他食源性病原菌的快速檢測(cè)提供了新的解決方案，對(duì)于食品產(chǎn)業(yè)鏈的病原追溯，突發(fā)性食品安全事件的應(yīng)急處置具有重要意義，在資源有限的多樣化環(huán)境中具有潛在的應(yīng)用前景。

相關(guān)產(chǎn)品：

Cas酶系列