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吐露港生物ToloBio提供基于CRISPR診斷技術(shù)提供CAS酶和相關(guān)RPA試劑盒

      吐露港（ToloBio）生物科技有限公司首次發(fā)現(xiàn) CRISPR-Cas12蛋白具備高效的“反式切割活性”，并基于該酶的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)研發(fā)了“福爾摩斯/HOLMES”核酸快速檢測(cè)平臺(tái)技術(shù)（one-Hour Low-cost Multipurpose highly Efficient System）。相比于傳統(tǒng)的分子診斷技術(shù)，基于CRISPR的HOLMES技術(shù)具備高靈敏、高特異、快速便捷等優(yōu)勢(shì)，被《Science》雜志譽(yù)為“下一代分子診斷技術(shù)”，在病原菌檢測(cè)、遺傳疾病篩查、精準(zhǔn)醫(yī)療等眾多領(lǐng)域有很大的應(yīng)用潛力。

 

Cas12a

 

HOLMES檢測(cè)平臺(tái)[1] 

· Cas12a家族是一類(lèi)由單個(gè)crRNA介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶

· 在HOLMES核酸檢測(cè)系統(tǒng)中，Cas12a: crRNA: 靶標(biāo)DNA分子三元復(fù)合物的形成會(huì)激活Cas12a的反式剪切活性，可無(wú)差別的剪切反應(yīng)體系中的ssDNA分子，包括熒光標(biāo)記的ssDNA探針，從而產(chǎn)生大量的熒光信號(hào)，指示檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

貨號(hào)

應(yīng)用

LbCas12a(Cpf1) Nuclease

100 pmol

32108-01

不僅可用于體外dsDNA的特異剪切，也可用于靶標(biāo)核酸的快速檢測(cè)，詳見(jiàn)HOLMES核酸快檢技術(shù)[1]

1000 pmol

32108-03

 

Cas12b

 

HOLMESv2檢測(cè)平臺(tái)[2]: 率先實(shí)現(xiàn)“一管法”和“絕對(duì)定量”

· 采用嗜熱菌來(lái)源的Cas12b，比Cas12a更加耐熱，使核酸擴(kuò)增與靶標(biāo)檢測(cè)在同一管中進(jìn)行

· Cas12b: crRNA: 靶標(biāo)DNA三元復(fù)合物會(huì)激活Cas12b的反式剪切活性, 可無(wú)差別剪切反應(yīng)中的ssDNA分子，包括熒光標(biāo)記的ssDNA探針，從而產(chǎn)生大量的熒光信號(hào)，指示檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性

· “一管法”體系既能保持對(duì)SNP和甲基化位點(diǎn)的分辨能力，又有效地避免氣溶膠污染的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)縮短檢測(cè)耗時(shí)

· 通過(guò)結(jié)合HOLMESv2與digital PCR體系，可實(shí)現(xiàn)對(duì)靶標(biāo)核酸的絕對(duì)定量

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

貨號(hào)

應(yīng)用

AapCas12b(C2c1) Nuclease

100 pmol

32118-01

最佳反應(yīng)溫度為60℃，可與LAMP恒溫?cái)U(kuò)增聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)一步法CRISPR檢測(cè)體系，詳見(jiàn)HOLMESv2核酸快檢技術(shù)[2]

1000 pmol

32118-03

 

Cas13a

      ToloBio擁有Cas12核酸檢測(cè)的方法學(xué)專(zhuān)利，并在2020年與美國(guó)科學(xué)院院士張鋒教授領(lǐng)銜創(chuàng)立的Sherlock Biosciences就Cas12和Cas13診斷技術(shù)達(dá)成了中美市場(chǎng)的“專(zhuān)利交叉授權(quán)”合作。2022年11月，雙方又進(jìn)一步簽署了全球范圍內(nèi)的CRISPR診斷“專(zhuān)利交叉授權(quán)”合作協(xié)議，完成了ToloBio在CRISPR檢測(cè)領(lǐng)域方法學(xué)專(zhuān)利的全面布局。

 

HOLMES與SHERLOCK“雙劍合璧”[3] 

· Cas13家族是一類(lèi)由crRNA單獨(dú)介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，可特異地識(shí)別并剪切靶標(biāo)ssRNA

· Cas13與crRNA、靶標(biāo)RNA形成三元復(fù)合物后，激活針對(duì)非特異序列ssRNA的“反式剪切活性”，將體系中的ssRNA切碎

· 靶標(biāo)RNA濃度越高，體系反式剪切ssRNA報(bào)告探針的速度更快，釋放熒光信號(hào)到達(dá)平臺(tái)期的時(shí)間越短

產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

貨號(hào)

應(yīng)用

LwaCas13a(C2c2) Nuclease

100 pmol

32117-01

反式剪切RNA報(bào)告探針，可用于開(kāi)發(fā)靶標(biāo)核酸的快速檢測(cè)試劑盒

1000 pmol

32117-03

 

貨號(hào)

產(chǎn)品

規(guī)格

JY0209

雙靶標(biāo)HybriDetect側(cè)向?qū)游鲈嚰垪l（彩虹型）

50T

JY0307

Tiosbio? CRISPR單酶切及擴(kuò)增產(chǎn)物檢測(cè)試紙條

50T

JY0301

CRISPR Cas12/13 HybriDetect試紙條

50T

JY0308

Tiosbio? CRISPR雙酶切檢測(cè)試紙條（變色龍）

50T

WLB8201KIT

DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（基礎(chǔ)型）

48T

WLE8202KIT

DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型）

48T

WLN8203KIT

DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（膠體金試紙條型）

48T

WLRB8204KIT

RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（基礎(chǔ)型）

48T

WLRE8205KIT

RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（熒光型）

48T

WLRN8206KIT

RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（膠體金試紙條型）

48T

WLB5001

DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體基礎(chǔ)型）

100T

WLN5002

DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體膠體金型）

100T

WLR5003

DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體熒光型）

100T

WLRB5001

RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體基礎(chǔ)型）

100T

WLRN5002

RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體膠體金型）

100T

WLRE5003

RNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒（液體熒光型）

100T


Cas12f

 

 

不同靶ssDNA存在時(shí)，Cas12f1行使高效反式剪切活性的熒光信號(hào)結(jié)果

· Cas12f核酸酶是依賴(lài)sgRNA介導(dǎo)的內(nèi)切核酸酶，傾向于特異結(jié)合并剪切靶標(biāo)ssDNA，且無(wú)需PAM位點(diǎn)

· Cas12f蛋白分子量普遍較?。s61.5kD），這是其主要優(yōu)勢(shì)之一

· 與Cas12a/b功能類(lèi)似，已有文獻(xiàn)報(bào)道，Cas12f對(duì)ssDNA靶標(biāo)中SNP位點(diǎn)的分辨能力高于Cas12[4]。


產(chǎn)品名稱(chēng)

規(guī)格

貨號(hào)

應(yīng)用

Un1Cas12f1(Cas14a1) Nuclease

100 pmol

32119-01

與Cas12a/b功能類(lèi)似，Cas12f也可用于靶標(biāo)核酸的快速檢測(cè)

1000 pmol

32119-03

 

CRISPR-Dx的優(yōu)勢(shì)

· 多重：聯(lián)檢/降本；微流控/盤(pán)式芯片；色碼CARMEN；體系多重

· 絕對(duì)定量：液相微球/固態(tài)微孔

· 超靈敏/特異：1-2個(gè)拷貝可測(cè)；識(shí)別PCR灰區(qū)、SNP位點(diǎn)、甲基化位點(diǎn)

· 超快速：1-5min內(nèi)完成剪切；恒溫?cái)U(kuò)增；One-Step；免擴(kuò)增；免提取核酸

· POCT/全自動(dòng)：LFA；LDT；全流程自動(dòng)化；便捷/成本低

 

其他CRISPR-Dx產(chǎn)品

產(chǎn)品名稱(chēng)

貨號(hào)

規(guī)格

AsCas12a(Cpf1)

32104-01

100 pmol

32104-03

1000 pmol

AacCas12b(C2c1)

32116-01

100 pmol

32116-03

1000 pmol

FnCas12a(Cpf1)

32106-01

100 pmol

32106-03

1000 pmol

Lb5Cas12a(Cpf1)

32110-01

100 pmol

32110-03

1000 pmol

SpCas9

32101-01

100 pmol

32101-03

1000 pmol

Sp-dCas9

32102-01

100 pmol

32102-03

1000 pmol

 

Cas Protein表達(dá)質(zhì)粒

產(chǎn)品名稱(chēng)

貨號(hào)

規(guī)格

pET28TEV-AsCas12a

92104

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-AsCas12a-NLS

92105

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-FnCas12a

92106

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-FnCas12a-NLS

92107

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-LbCas12a

92108

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-LbCas12a-NLS

92109

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-Lb5Cas12a

92110

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-BbCas12a

92111

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-BoCas12a

92112

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-HkCas12a

92113

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-OsCas12a

92114

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-TsCas12a

92115

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-AacCas12b

92116

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-LwaCas13a

92117

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-AapCas12b

92118

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-Un1Cas12f1 (Cas14a1)

92119

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

pET28TEV-Lb4Cas12a

92120

1 ug (20uL, 50 ng/uL)

 

CRSIPR體系反式剪切報(bào)告探針

品名

貨號(hào)

規(guī)格

HOLMES ssDNA reporter (FAM)

31101

10 nmol powder

HOLMES ssRNA reporter (FAM)

31111

10 nmol powder

 

Reference:

[1] Li S, Cheng Q, Wang J, et al. CRISPR-Cas12a-assisted nucleic acid detection[J]. Cell Discovery. 2018, 4: 20.

[2] Li L, Li S, Wu N, et al. HOLMESv2: A CRISPR-Cas12b-Assisted Platform for Nucleic Acid Detection and DNA Methylation Quantitation[J]. ACS Synthetic Biology. 2019, 8(10): 2228-2237.

[3] Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Lee JW, et al. Nucleic acid detection with CRISPR-Cas13a/C2c2. Science. 2017;356(6336):438-442.

[4] Harrington LB, Burstein D, Chen JS, et al. Programmed DNA destruction by miniature CRISPR-Cas14 enzymes. Science. 2018;362(6416):839-842.